Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Commencer par une culture décongelée de Mycobacterium bovis BCG lux, une souche bioluminescente génétiquement modifiée de Mycobacterium bovis atténuée exprimant l’enzyme rapporteure luciférase.
Inoculer la suspension dans une fiole de culture contenant le milieu de croissance supplémenté en hygromycine antibiotique. Couver. BCG lux héberge le gène résistant à l’hygromycine, facilitant sa survie et sa croissance.
Après l’incubation, préparer des dilutions de culture appropriées à l’aide d’un tampon dans des tubes de luminomètre. Transfert vers le luminomètre, chargé d’une solution de substrat d’aldéhyde aliphatique à longue chaîne. Au cours de la course, l’aldéhyde est injecté dans la suspension mycobactérienne qui pénètre dans les cellules.
La luciférase bactérienne catalyse l’oxydation du mononucléotide de flavine réduite endogène et de l’aldéhyde, ce qui entraîne l’émission de lumière bleu-vert. L’intensité de bioluminescence mesurée indique l’activité métabolique du BCG lux et est corrélée à la mesure de bactéries viables ou d’unités formant colonies, UFC.
Ensuite, centrifugez la culture mycobactérienne restante. Remettre en suspension la pastille mycobactérienne dans un tampon
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