Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:23 min • July 8th, 2025
Pour mesurer la charge bactérienne in vivo, il faut commencer par des larves d’insectes stérilisées pré-infectées par le Bacille de Calmette-Guérin, ou BCG lux. BCG lux est une souche génétiquement modifiée de Mycobacterium bovis BCG exprimant la luciférase, une enzyme productrice de bioluminescence.
Transférez une larve d’insecte dans un tube de matrice de lyse contenant un tampon avec des billes d’acier. À l’aide d’un homogénéisateur, homogénéisez la larve en libérant les composants intracellulaires, y compris les bactéries, dans le tampon.
Centrifugez le tube pour recueillir l’homogénat et transférez-le dans un tube luminomètre.
Lavez le tube matriciel avec un tampon contenant un détergent pour solubiliser les fragments cellulaires et libérer les bactéries résiduelles.
Combinez les fractions dans le même tube de luminomètre et ajoutez le substrat de luciférase. Les substrats pénètrent dans les bactéries et interagissent avec les enzymes luciférase, ce qui entraîne une bioluminescence. Chargez le tube dans un luminomètre et mesurez la bioluminescence.
Le luminomètre mesure l’intensité de la lumière émise et calcule l’unité de lumière relative, ou RLU, indicative de la charge in v
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