Technique de gavage intragastrique pour l’infection contrôlée à Helicobacter chez la souris
JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 3:04 min • July 8th, 2025
Pour établir un modèle d’infection à Helicobacter pylori, commencez avec une souris anesthésiée et exempte d’agents pathogènes. Retenez fermement la souris pour minimiser les mouvements pendant la procédure.
Prenez une seringue remplie d’une suspension bactérienne. Connectez un cathéter en polyéthylène à l’aiguille de la seringue pour le gavage intragastrique - une technique qui consiste à administrer la suspension directement dans l’estomac.
Insérez le cathéter au centre de la bouche ouverte pour accéder à l’œsophage, un tube musculaire reliant la bouche à l’estomac. Guidez doucement le cathéter à travers l’œsophage jusqu’à ce qu’il atteigne l’estomac et délivrez la suspension bactérienne directement dans son environnement acide.
Les bactéries inoculées sécrètent de l’uréase, une enzyme qui convertit l’urée en ammoniac et en dioxyde de carbone. L’ammoniac augmente le pH de l’estomac, neutralise l’acidité et permet aux bactéries de survivre.
Ces bactéries utilisent leurs flagelles pour traverser la couche protectrice de mucus, ce qui leur permet d’atteindre l’épithélium gastrique, où elles adhèrent aux cellules à l’aide de protéines d’adhésion. Lors de la fixation, ces bactéries libèrent des facteurs de virulence qui perturbent les jonctions serrées entre les cellules épithéliales.
Cette perturbation structurelle favorise l’invasion bactérienne et la colonisation dans les tissus plus profonds, établissant finalement une infection contrôlée dans l’estomac.
Ajoutez des suspensions bactériennes dans des tubes de polystyrène de 15 millilitres et utilisez une boucle en plastique pour transférer une gouttelette de 10 à 20 microlitres de chaque culture sur des lames de microscope en verre individuelles. Ensuite, évaluez la viabilité et la motilité des bactéries sous microscopie à contraste de phase à un grossissement de 100 fois.
N’utilisez l’inocula de H. pylori que si la majorité des bactéries ont une forme bacillaire. L’inocula de H. felis doit contenir principalement des bactéries de forme hélicoïdale et charger l’inocula dans des seringues individuelles jetables de 1 millilitre. Équipez chaque seringue d’une aiguille de calibre 23 et utilisez une pellicule de paraffine plastique pour fixer un cathéter en polyéthylène jetable à chaque aiguille.
Ensuite, retenez manuellement une souris de 6 à 8 semaines, exempte d’agents pathogènes spécifiques et d’Helicobacter par la peau du cou et de la queue et insérez un cathéter au centre de la mâchoire ouverte. Guidez le cathéter dans une direction caudale vers l’œsophage, en étendant le cou de la souris pour faciliter l’accès à l’estomac par l’œsophage et loin de la trachée jusqu’à ce que la majeure partie ou la totalité du cathéter ne soit plus visible et qu’une résistance se fasse sentir. Ensuite, délivrez au moins 1 x 105 bactéries pour assurer une colonisation optimale dans la pathologie de la maladie.
Aperçu
Cet article décrit la mise en place d'un modèle d'infection par Helicobacter pylori chez la souris. La procédure consiste en une administration intragastrique par sonde afin d'injecter directement des suspensions bactériennes dans l'estomac, permettant ainsi d'étudier la colonisation bactérienne et ses effets sur le tissu gastrique.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Microbiologie
- Maladies infectieuses
- Gastro-entérologie
Contexte
- Helicobacter pylori est une bactérie associée aux infections gastriques.
- Comprendre son mécanisme d'infection est essentiel pour développer des traitements.
- Le modèle permet aux chercheurs d'étudier le comportement bactérien dans un environnement contrôlé.
- Les techniques d'inoculation sont essentielles pour une colonisation réussie.
Objectif de l'étude
- Établir un modèle fiable pour l'étude des infections à H. pylori.
- Étudier les mécanismes de survie et de colonisation bactériennes.
- Évaluer l'impact de H. pylori sur les cellules épithéliales gastriques.
Méthodes utilisées
- Utilisation de souris anesthésiées et exemptes de pathogènes pour le modèle d'infection.
- Technique de gavage intragastrique pour l'administration bactérienne.
- Évaluation de la viabilité et de la motilité bactériennes à l'aide de la microscopie.
- Surveillance de la forme et des caractéristiques bactériennes en vue de l'inoculation.
Résultats principaux
- Les bactéries colonisent avec succès l'estomac en neutralisant l'acidité.
- Les flagelles permettent aux bactéries de naviguer à travers le mucus jusqu'aux cellules épithéliales.
- Les facteurs de virulence perturbent les jonctions serrées, facilitant une invasion plus profonde des tissus.
- Des doses bactériennes optimales sont nécessaires pour une colonisation efficace.
Conclusions
- Le modèle établi est efficace pour l'étude des infections à H. pylori.
- La compréhension du comportement bactérien peut éclairer les stratégies de traitement.
- Les recherches futures peuvent s'appuyer sur ce modèle pour explorer des interventions thérapeutiques.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
L'administration intragastrique contrôlée par gavage pour l'infection à Helicobacter chez la souris permet une modélisation précise des interactions hôte-pathogène, soutenant la validation précoce des cibles et la réduction des risques mécanistiques dans la recherche sur les maladies gastro-intestinales. Cette approche fournit des paramètres d'infection reproductibles, facilitant la confiance prédictive dans les études précliniques et orientant les décisions stratégiques pour les programmes d'anti-infectieux et d'immunomodulateurs.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet l'analyse des mécanismes hôte-pathogène liés aux maladies gastriques.
- Permet la validation fonctionnelle des facteurs de virulence bactériens et des voies de réponse de l'hôte.
- Facilite la réduction des risques biologiques en fournissant un modèle d'infection contrôlé.
- Améliore la fiabilité prédictive des tests d'hypothèses thérapeutiques en aval.
Développement de criblages et de tests
- Établit des conditions d'infection standardisées pour un criblage reproductible de composés.
- Permet une évaluation quantitative de la colonisation bactérienne et de la réponse du tissu hôte.
- Facilite le développement de tests pour évaluer des agents anti-Helicobacter ou des immunomodulateurs.
- Permet la réutilisation de la plateforme pour des études comparatives entre souches bactériennes ou interventions.
Recherche translationnelle et préclinique
- Offre un système pertinent pour modéliser les pathologies gastriques associées à l'infection par Helicobacter.
- Aligne les résultats précliniques sur le développement de biomarqueurs translationnels pour les maladies gastriques.
- Permet la progression ajustée au risque de candidats ciblant les voies d'infection ou d'inflammation.
- Facilite la continuité entre la découverte mécanistique et la validation préclinique.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ce modèle d'infection intragastrique fait le lien entre la découverte précoce et la recherche préclinique, permettant des études fondées sur des hypothèses et des mesures quantitatives pour l'identification et la validation de candidats thérapeutiques.
- Biologie de la découverte : Soutient les tests d'hypothèses sur la colonisation bactérienne, la réponse de l'hôte et la fonction des facteurs de virulence.
- Écrantage : Fournit des paramètres d'infection reproductibles pour évaluer l'efficacité de candidats.
- Analytique : Permet la mesure quantitative de la charge bactérienne et de la pathologie tissulaire pour des analyses comparatives.
- Recherche translationnelle : Relie les découvertes mécanistiques à des biomarqueurs pertinents pour la maladie et à des critères d'évaluation précliniques.
- Réutilisation en entreprise : Offre un modèle standardisé et évolutif, adaptable à diverses souches de Helicobacter et à différentes stratégies d'intervention.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique en biologie des infections.
- Valeur opérationnelle : Fournit des protocoles d'infection standardisés, reproductibles et évolutifs.
- Valeur stratégique : Éclaire les décisions d'engagement ou de retrait et améliore l'efficacité du capital en réduisant les risques biologiques en phase avancée.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation et une progression ajustées au risque des actifs anti-infectieux et immunomodulateurs.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en manipulation animale et en modélisation des infections.
- Requiert un accès à la microscopie en contraste de phase pour l'évaluation de la viabilité bactérienne.
- Exige une standardisation interéquipes de la préparation de l'inoculum et du dosage.
- Adaptable à différentes espèces de Helicobacter et souches de souris, selon les indications du protocole.
- Dépend du maintien de colonies animales exemptes de pathogènes et de cultures bactériennes validées.
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Dernière mise à jour : 29 août 2026