Quantification de la charge d’Helicobacter pylori dans l’estomac d’une souris infectée

Pour quantifier la colonisation par Helicobacter pylori dans l’estomac d’une souris infectée, il faut commencer par le tissu gastrique aplati contenant les régions du corps et de l’antre, en suspension dans un milieu nutritif pour favoriser la viabilité bactérienne.

Homogénéiser pour décomposer le tissu gastrique avec la couche de mucus, libérant Helicobacter pylori du tissu dans le milieu. Effectuer des dilutions en série de l’homogénat gastrique résultant à l’aide d’un fluide.

Obtenez des plaques d’agar-gélose au sang de cheval séché, HBA, divisées en plusieurs segments. Les plaques HBA sont complétées par un mélange d’antibiotiques. Transférez chaque dilution d’homogénat sur des segments séparés de la plaque et étalez-la uniformément.

Après le séchage, positionnez les plaques en position inversée à l’intérieur d’un bocal de culture anaérobie humidifié avec des mélanges de gaz spécialisés. Couver.

L’environnement microaérophile fourni par le bocal de culture anaérobie en conjonction avec les nutriments HBA facilite la croissance et la formation de colonies d’Helicobacter pylori. Les antibiotiques contenus dans l’HBA inhibent la croissance des espèces bactériennes du microbiote gastrique endogène.

Compter les colonies d’Helicobacter pylori sur les segments de plaque HBA se situant dans une plage de dénombrement spécifique.

Calculez la charge d’Helicobacter pylori dans le tissu gastrique, indiquant l’étendue de la colonisation bactérienne dans le tissu.

Pour compter le nombre de H. pylori viables dans l’estomac après l’infection, homogénéisez les échantillons d’estomac stockés dans le BHI et effectuez des dilutions en série dupliquées des homogénats gastriques résultants dans un bouillon frais et stérile.

Divisez l’gélose pré-séchée au sang de cheval, ou plaques HBA, complétées par des antibiotiques supplémentaires en trois ou quatre segments, et en utilisant une adaptation de la technique de Miles et Misra, ajoutez 10 à 100 microlitres de chaque dilution d’homogénat d’estomac sur un segment de chaque plaque de gélose. Étalez les homogénats avec des boucles en plastique stériles et laissez sécher les plaques. Ensuite, placez les plaques en position inversée dans des bocaux de gaz anaérobies contenant une boîte de Pétri d’eau et un pack de gaz, puis incubez les bocaux à 37 degrés Celsius pendant quatre à sept jours.

Lorsque des colonies peuvent être observées, énumérez les segments contenant entre 10 et 100 colonies isolées.