Quantification de l’infiltration de cellules immunitaires dans le tissu vésical de souris infecté par E. coli uropathogène à l’aide de la cytométrie en flux
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:43 min • July 8th, 2025
Pour quantifier l’infiltration de cellules immunitaires dans le tissu vésical de souris infecté par E. coli uropathogène, placez le tissu haché dans un tampon de digestion contenant de la collagénase et de la désoxyribonucléase.
Incuber en secouant régulièrement pour perturber les tissus.
La collagénase digère la matrice extracellulaire du tissu, libérant des cellules. La désoxyribonucléase dégrade l’ADN libre interférent.
Après l’incubation, ajoutez un tampon avec un agent chélateur et du sérum de veau fœtal pour inactiver les enzymes digestives.
Passez le mélange digéré dans une passoire pour éliminer les débris tissulaires et le tissu conjonctif, en obtenant une suspension unicellulaire.
Centrifugez et remettez en suspension les cellules dans un tampon contenant des anticorps bloquants Fc. Ces anticorps se lient aux récepteurs Fc des cellules immunitaires pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Ajoutez des anticorps anti-CD45 marqués au fluorophore, qui se lient à la protéine CD45 transmembranaire sur les cellules immunitaires.
Centrifugez et faites passer les cellules remises en suspension dans une crépine de cellules pour éliminer les agrégats de cellules.
À l’ai
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques