Génération d’un modèle de culture cellulaire in vitro de la co-infection paludisme-VIH

Commencez avec une plaque multi-puits contenant des cellules mononucléées du sang périphérique humain, ou PBMC dérivées d’un virus de l’immunodéficience humaine, ou d’un donneur infecté par le VIH.

Les PBMC contiennent diverses cellules immunitaires, y compris des lymphocytes T CD4 positifs infectés par le VIH avec de l’ADN proviral intégré.

Ensemencez les puits avec un mélange d’érythrocytes parasités de Plasmodium falciparum, ou PfRBC, exprimant des antigènes dérivés du parasite, et de globules rouges non infectés.

Au cours de l’incubation, les antigènes des PfRBCs interagissent avec les récepteurs des cellules immunitaires, les activant et libérant des cytokines.

Ces cytokines déclenchent la signalisation en aval dans les lymphocytes T CD4, initiant la transcription de l’ADN proviral du VIH et la synthèse de nouveaux ARN viraux.

Les ARN viraux et les protéines du VIH forment des particules virales qui bourgeonnent, infectant de nouveaux lymphocytes T CD4 et propageant l’infection par le VIH.

L’infection progressive par le VIH perturbe la sécrétion de cytokines, ce qui altère la réponse immunitaire contre les globules rouges et entraîne une infection palustre persistante.

Au fil du temps, les globules rouges infectés libèrent des parasites qui envahissent les nouveaux globules rouges, faisant proliférer les parasites du paludisme et établissant le modèle de culture cellulaire de co-infection paludisme-VIH.

Pour mettre en place les cultures de co-infection, commencez par ensemencer 1 x 10⁶ de PBMC séropositifs et séronégatifs fraîchement isolés dans 100 microlitres de RPMI-S+ par puits dans une plaque de 24 puits. Portez le volume total de chaque puits à 500 microlitres avec 400 microlitres de RPMI-S+.

Ensuite, en trois exemplaires et dans un volume total de 500 microlitres par puits, ajoutez 3 x 10⁶ globules rouges non infectés ou 3 x 10⁶ globules rouges parasités aux cellules infectées et non infectées par le VIH. Placez la plaque de co-infection dans un incubateur de culture cellulaire.

Ensuite, après la période d’expérience appropriée, granulez les cellules et prélevez 700 microlitres de surnageant de culture dans chaque puits. Centrifugez le surnageant pour éliminer tous les débris. Ensuite, aliquote les échantillons au besoin ; étiquetez les tubes et congelez-les à moins 20 degrés Celsius ou moins pour une analyse ultérieure.