JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 2:33 min • July 8th, 2025
Prenez une culture d’organoïdes intestinaux humains. Les organoïdes sont constitués de cellules épithéliales faisant face à la lumière centrale, imitant l’architecture in vivo.
Prenez un micro-injecteur contenant des sporozoïtes en forme de croissant – la forme infectieuse – de Cryptosporidium parvum, un parasite.
Injectez des sporozoïtes dans la lumière organoïde.
Les lectines parasites se lient à des glucides spécifiques sur les cellules épithéliales, facilitant leur entrée dans une vacuole parasitophore.
Le parasite internalisé se transforme en trophozoïte – le stade d’alimentation – qui acquiert des nutriments et subit une reproduction asexuée pour former un méront de type I, contenant des mérozoïtes – la forme envahissante.
Les mérozoïtes libérés infectent les cellules épithéliales voisines et développent des mérontes de type II contenant des mérozoïtes.
Les mérozoïtes pénètrent dans les cellules voisines et se différencient en microgamont ou macrogamont - stades reproducteurs mâles et femelles.
Le microgamont subit une division pour former des microgamètes, qui sont libérés à l’extérieur de la vacuole.
Un microgamète féconde le macrogamont, produisant un zygote.
Le zygote subit une division, formant un oocyste contenant des sporozoïtes. Lors de leur libération, les sporozoïtes répètent le cycle d’infection.
Récoltez les organoïdes pour évaluer la progression de l’infection.
Pour micro-injecter les parasites dans la face apicale d’un organoïde 3D, utilisez d’abord un extracteur de micropipette pour préparer des capillaires d’injection de verre. Utilisez une pince pour couper l’extrémité du capillaire à un diamètre de 9 à 12 micromètres, afin de permettre un écoulement facile des sporozoïtes, ou des oocystes si vous choisissez d’injecter directement les oocystes, et utilisez des pointes de micro-chargeur pour remplir chaque capillaire avec une suspension rapide d’oocyste ou de sporozoïte marquée en vert.
Ensuite, chargez le premier capillaire rempli de sporozoïte dans un micro-injecteur et utilisez un microscope inversé à un grossissement de 5x et à une pression constante pour micro-injecter 100 à 200 nanolitres de suspension dans chaque organoïde.