Visualisation de pièges extracellulaires dans les macrophages à partir de fluides de lavage broncho-alvéolaire humain

Pendant l’infection, les macrophages alvéolaires libèrent des pièges extracellulaires de macrophages ou MET pour éliminer les agents pathogènes.

Les MET sont constitués de fibres de chromatine complexées avec des peptidylarginine désiminases, des PAD, des métalloprotéinases matricielles et des histones citrullinées.

Pour visualiser les MET dans les macrophages à partir du liquide de lavage broncho-alvéolaire, centrifugez d’abord le fluide.

Plaquez les cellules remises en suspension sur des lamelles à l’intérieur de puits à plaques à plusieurs puits.

Les macrophages se fixent aux lamelles, tandis que les autres cellules restent en suspension et sont jetées.

Fixer les macrophages en préservant la structure cellulaire. Perméabiliser pour accéder aux cibles cellulaires.

Ajoutez des protéines bloquantes, empêchant la liaison d’anticorps non spécifiques.

Complétez avec un cocktail d’anticorps primaires qui se lie pour cibler les histones citrullinées, les PAD et les métalloprotéinases matricielles, respectivement.

Ajoutez différents anticorps secondaires marqués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires liés à la protéine MET cible.

Montez les cellules avec un support de montag