Établissement de l’infection des feuilles de la plante de riz par inoculation fongique par blessure

Commencez par une boîte de culture contenant une feuille de riz avec de petites blessures, exposant l’épiderme sous-jacent.

Appliquez une solution humidifiante contenant du Tween-20, créant un environnement propice à la croissance fongique.

Placez un bouchon mycélien de Magnaporthe grisea, composé de conidiophores avec des conidies - des spores fongiques reproductrices, sur le site blessé.

Incuber la feuille dans une chambre humide dans des conditions photopériodiques pour favoriser la croissance fongique.

Pendant l’incubation, les conidiophores libèrent des spores qui adhèrent à l’épiderme exposé, développant des tubes germinaux.

Le tube germinatif se différencie en un appressorium en forme de dôme, qui génère une pression de turgescence élevée, formant un hyphe pointu - ou cheville de pénétration.

Le piquet de pénétration sécrète des enzymes dégradant la paroi cellulaire, facilitant son entrée dans la cellule épidermique et sa différenciation en hyphes invasifs pour l’acquisition de nutriments.

Ces hyphes se développent et se propagent dans les cellules de l’épiderme à travers les plasmodesmes - reliant les canaux entre les cellules et établissant l’infection.

Le champignon sécrète des toxines, provoquant une nécrose cellulaire et la formation de lésions près du site blessé sur les feuilles, indiquant une infection fongique.

À l’aide d’une aiguille anatomique, grattez trois plaies de 2 à 3 centimètres de long dans les nervures principales des feuilles de riz détachées. Placez les feuilles grattées sur des cure-dents et vaporisez-les avec la solution Tween-20. Ensuite, coupez un bouchon mycélien de 1/2 x 1/2 centimètre dans les plaques OTA contenant chaque souche de M griseus. Placez les mottes sur les feuilles blessées et incubez-les dans une chambre humide à 25 degrés Celsius pendant 3 à 8 jours.

Après la période d’incubation, examiner et évaluer les lésions selon le système de notation fourni par l’Institut international de recherche sur le riz. Enfin, photographiez les feuilles malades pour évaluer l’infectiosité des souches testées.