Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:56 min • July 8th, 2025
Prenons une culture de cellules cancéreuses du foie humain, génétiquement modifiées pour exprimer le polypeptide de co-transport du taurocholate de sodium ou NTCP - un récepteur transmembranaire.
Ajouter le virus de l’hépatite B recombinant, ou VHB. Le virus comprend une enveloppe externe contenant des protéines de surface et une nucléocapside interne enfermant le génome. L’insertion d’un gène rapporteur de la luciférase inhibe la capacité de reproduction du virus.
La protéine d’enveloppe virale se lie au récepteur NTCP de la cellule hôte.
Le NTCP interagit avec le récepteur du facteur de croissance épidermique, l’EGFR, et s’oligomérise, induisant une endocytose du virus médiée par l’EGFR.
L’enveloppe virale fusionne avec la membrane de l’endosome pour libérer la nucléocapside, qui se désassemble au niveau du complexe de pores nucléaires.
Le génome viral pénètre dans le noyau et se convertit en ADN circulaire fermé de manière covalente ou ADNcc – un modèle stable – codant pour des protéines virales, y compris la luciférase.
À des intervalles prédéfinis, récoltez les cellules et lysez-les pour libérer la luciférase intracellulaire.
Introduisez un substrat de rapporteur. La luciféras
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