Instillation intrabronchique de Streptococcus pneumoniae dans des modèles de rongeurs immunocompétents

Procurez-vous un dispositif d’intubation stérile composé d’une canule métallique avec un tube en polyéthylène relié à une aiguille métallique.

Fixez une seringue contenant Streptococcus pneumoniae à l’aiguille et remplissez le tube.

Ensuite, placez un rat immunocompétent anesthésié en position couchée.

Insérez l’extrémité libre de la canule métallique dans la gueule du rat. Avancez-le dans la trachée vers la bronche gauche et le long du poumon gauche à une profondeur appropriée.

Avancez la tubulure jusqu’à l’extrémité de la canule et instillez la suspension bactérienne dans le lobe gauche du poumon

La capsule bactérienne et les enzymes associées à la surface empêchent le piégeage bactérien dans le mucus. De plus, Streptococcus pneumoniae se fixe à la surface des récepteurs des cellules épithéliales bronchiques, facilitant l’endocytose et la libération à la surface basolatérale.

Les bactéries sécrètent des toxines qui endommagent les cellules et les barrières épithéliales, déclenchant une réponse immunitaire.

Cependant, Streptococcus pneumoniae a développé des stratégies pour échapper à la réponse immunitaire de l’hôte et établir une infection pulmonaire.

Placez un tapis jetable propre sur le plan de travail, près du bain-marie.

Pour préparer la surface de travail et le dispositif d’intubation, stérilisez d’abord la canule métallique et le tube en polyéthylène conformément au protocole de texte, puis transférez-les dans son tube de stockage en verre sur la surface de travail. Ensuite, retirez le capuchon du tube de stockage et faites glisser l’extrémité de la poignée de la canule vers l’extrémité ouverte du tube. À l’aide d’une pince stérile, retirez une longueur de tube en polyéthylène du bécher et insérez-la à l’intérieur de la canule métallique stérile, en vous assurant qu’elle se déplace librement. Placez un repère à un endroit prédéterminé avec un stylo indélébile.

Ensuite, installez une aiguille stérile jetable de calibre 25 sur l’extrémité libre du tube en polyéthylène en glissant l’aiguille sur plusieurs millimètres dans le tube. Ensuite, utilisez une solution saline stérile pour remplir une seringue jetable fraîche de 1 millilitre. Fixez la seringue à l’aiguille fixée sur le tube en polyéthylène et rincez tout le volume de solution saline à travers le tube.

Jetez la seringue usagée dans le récipient pour objets tranchants. Ensuite, remplissez une nouvelle seringue stérile jetable de 1 millilitre avec l’inoculum à base de gélose du bain-marie. Remettez en place l’aiguille et le tube de calibre 25 et rincez la gélose à travers le tube en appuyant sur le piston jusqu’à ce que le tube soit complètement rempli de gélose.

Après avoir anesthésié le rat selon le protocole textuel, placez l’animal en position couchée sur le tapis jetable, la tête tournée vers la droite et la queue vers la gauche. Ensuite, insérez l’extrémité libre de la canule métallique dans la bouche de l’animal. Tournez la canule de manière à ce que l’extrémité libre soit inclinée vers le haut et avancez-la doucement dans la trachée, en contournant soigneusement les structures laryngées avec un léger mouvement de torsion.

Confirmez l’insertion dans la trachée plutôt que dans l’œsophage en faisant glisser doucement la canule légèrement vers l’avant et vers l’arrière à plusieurs reprises, tout en utilisant l’index gauche pour palper les anneaux trachéaux.

Pour assurer l’intubation dans la trachée et non dans l’œsophage, déplacez légèrement la canule d’avant en arrière et tâtez les crêtes. Si la canule glisse doucement dans la gorge et que les crêtes ne sont pas perceptibles, retirez l’appareil et réessayez.

Lorsque la canule atteint la bifurcation où la trachée se divise en bronches gauche et droite, effectuez un léger mouvement de torsion vers le côté gauche de l’animal pour vous assurer que la canule est insérée dans la bronche gauche.

Une erreur courante consiste à ne pas placer l’inoculum assez profondément dans les poumons, ce qui peut bloquer les voies respiratoires et inhiber la respiration. Lorsqu’une canule est tournée dans le bon angle, elle doit glisser facilement dans la bronche gauche et avancer doucement jusqu’à la profondeur appropriée.

Avancez la canule métallique jusqu’à ce que l’extrémité soit à mi-chemin vers le bas du poumon gauche, en utilisant le repère de guidage précédemment placé pour confirmer que la profondeur appropriée a été atteinte. Avec la canule métallique en place, avancez le tube en polyéthylène de plusieurs millimètres à l’aide du repère précédemment placé sur le tube pour vous assurer qu’il n’est avancé que suffisamment loin pour sortir de l’extrémité de la canule métallique et ne pas perforer le poumon.

Avec les deux canules en place, utilisez la seringue attachée pour instiller 100 microlitres de suspension de gélose profondément dans le grand lobe du poumon gauche. Prélevez plusieurs millimètres de la tubulure et retirez délicatement le dispositif d’intubation intact. Remettez-le dans le tube de stockage en verre et placez l’animal dans une cage fraîche pour récupérer.