Canulation des canaux lymphatiques mésentériques dans un modèle de rat pour prélever de la lymphe

Commençons par un rat intervenu chirurgicalement avec son abdomen exposé.

Localisez le canal lymphatique mésentérique supérieur, perpendiculaire au rein droit et positionné devant et parallèlement à l’artère mésentérique.

Passez des pinces droites dans le lit adipeux périrénal.

Tirez une canule lymphatique à travers le lit adipeux périrénal, en positionnant une extrémité adjacente au canal lymphatique et en laissant l’autre extrémité faire saillie à l’extérieur du corps de l’animal.

Ensuite, créez une petite incision dans le canal lymphatique.

Remplissez la canule d’une solution anticoagulante et insérez-la dans le canal lymphatique.

À l’intérieur du canal, le liquide lymphatique contient plusieurs biomolécules, y compris des facteurs de coagulation qui déclenchent une cascade d’événements menant à la formation de caillots.

Cependant, l’anticoagulant se lie aux facteurs de coagulation, inhibant leur activité.

Cela permet à la lymphe non coagulée de circuler librement à travers la canule.

Appliquez un adhésif vétérinaire sur le trou d’entrée pour fixer la canule en place.

La veille de l’opération, coupez les canules à la longueur appropriée et utilisez une lame chirurgicale stérile pour faire un biseau à l’extrémité de chaque morceau de tube. Ensuite, pour préparer la canule intraduodénale, enroulez la canule sur elle-même, puis chauffez la canule pour créer un point d’ancrage dans le tube.

Le jour de l’opération, rasez la fourrure du côté droit de l’abdomen et du cou et des régions de la clavicule gauche d’un rat adulte anesthésié, puis nettoyez les régions chirurgicales de manière aseptique avec trois solutions successives de povidone iodée et des gommages à l’éthanol à 70 %.

Pour canuler le canal lymphatique mésentérique, placez l’animal avec son côté droit vers le haut et utilisez une lame de scalpel stérile pour ouvrir la couche supérieure de la paroi musculaire abdominale avec une incision droite de quatre centimètres s’étendant de l’apophyse xiphoïde au flanc droit, à environ deux centimètres sous la marge costale.

Rétractez l’intestin grêle sous la paroi abdominale gauche et utilisez deux à trois morceaux de gaze stérile saturés de solution saline normale pour le maintenir en place. Ensuite, pontez le rat sur une seringue en plastique de 10 millilitres placée horizontalement sous le dos de l’animal au niveau du rein droit pour aider à la visualisation du canal lymphatique mésentérique.

Localisez le canal lymphatique mésentérique supérieur, d’environ 0,5 à 1 millimètre de diamètre, perpendiculaire au rein droit, et immédiatement rostral et parallèle à l’artère mésentérique pulsante rouge foncé. Notez que chez les rats non à jeun, comme indiqué ici, le canal lymphatique mésentérique supérieur est blanc, opaque et plus facile à visualiser que chez les rats à jeun.

Ensuite, passez une paire de pinces droites dans le lit adipeux péri-rénal à la marge inférieure du rein droit parallèlement au canal lymphatique mésentérique supérieur, et à travers les couches de tissu conjonctif, immédiatement sous la veine cave. Ensuite, à l’aide de la pointe de la pince, tirez la canule lymphatique à travers le lit adipeux péri-rénal avec une extrémité immédiatement adjacente au canal lymphatique mésentérique, et l’autre extériorisée de l’animal au niveau du rein droit.

Ensuite, à l’aide d’un microscope chirurgical et d’une pince de bijoutier, isolez le canal lymphatique mésentérique à travers les couches sus-jacentes de tissu conjonctif et adipeux par dissection contondante, en commençant par l’extrémité inférieure et en prenant soin de ne pas endommager le canal lymphatique. Lorsque le canal a été isolé, utilisez la pointe de la pince à pointe fine pour faire un petit trou dans le canal lymphatique. Après s’être assuré que la canule lymphatique est complètement remplie de solution anticoagulante et qu’il n’y a pas d’espace d’air, utilisez une petite paire de pinces pour insérer la canule lymphatique à environ deux à quatre millimètres à l’intérieur du canal lymphatique mésentérique via la ponction.

Si la canulation réussit, un écoulement progressif de la lymphe intestinale sera observé à partir de l’extrémité collectrice libre de la canule. Lorsque cela se produit, placez une petite goutte de colle cyanoacrylate sur le trou d’entrée dans le canal lymphatique pour fixer la canule, en prenant soin de ne pas obstruer le vaisseau avec un excès de colle.