Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:03 min • August 20th, 2025
Prenez un rat préalablement immunisé avec une émulsion adjuvante d’antigène contenant des auto-antigènes dérivés des glandes lacrymales et des antigènes étrangers.
Réinjecter l’émulsion et injecter par voie intrapéritonéale la toxine coqueluche, assurant une activation maximale des lymphocytes T.
Les cellules activées se différencient en lymphocytes T à mémoire effecteur circulant, TEM et en lymphocytes T à mémoire résidant dans les tissus, TRM. Un pourcentage des TRM réside dans les tissus de la surface oculaire.
Après un intervalle défini, injectez les antigènes dans la sous-conjonctive fornicéale et les glandes lacrymales, induisant une inflammation localisée.
Les cellules présentatrices d’antigènes sous-conjonctivales, les APC, présentent des antigènes aux TRM, déclenchant la libération de cytokines.
Les cytokines incitent les cellules épithéliales conjonctivales à libérer des chimiokines, qui recrutent des MET.
Les APC réactivent les TEM infiltrés, déclenchant la libération de cytokines pro-inflammatoires.
Les cytokines provoquent la mort des cellules calicinales conjonctivales productrices de mucine, diminuant les niveaux de mucine et provoquant une instabilité du film lacrymal.
Les cytokines induisent la mort cellulaire des glandes lacrymales – réduisant la production de larmes – et stimulent les cellules épithéliales cornéennes à produire des métalloprotéinases matricielles, endommageant ainsi la cornée.
Évaluez le rat pour les caractéristiques cliniques indiquant une induction réussie de la sécheresse oculaire.
Le jour zéro, distribuez 200 microlitres de l’émulsion qui contient 1 milligramme d’extrait de glande lacrymale et 200 microgrammes d’ovalbumine, et complétez l’adjuvant de Freund dans des seringues Luer-lock de 1 millilitre, et équipez les seringues d’aiguilles de calibre 27.
Sans utiliser d’anesthésie, injectez par voie sous-cutanée l’émulsion à la base des queues de rat. Puis, le 14e jour, de la même manière, injectez 200 microlitres du même antigène et de l’adjuvant de Freund incomplet. Le même jour, injectez par voie intrapéritonéale 300 nanogrammes de toxine coqueluche dans 100 microlitres de PBS.
Le jour 48, pesez la quantité requise d’ovalbumine et dissolvez-la dans du PBS, puis combinez l’ovalbumine avec l’extrait de glande lacrymale décongelé préparé plus tôt dans cette vidéo, en faisant une solution antigénique contenant 1 milligramme par millilitre d’ovalbumine et 1 milligramme par millilitre d’extrait de glande lacrymale.
Après avoir anesthésié les rats, injectez 5 microlitres d’antigène dans la sous-conjonctive forniciale de l’œil, puis injectez 20 microlitres d’antigène dans la glande lacrymale.