Coloration à l’acétoxyméthyle de calcéine pour évaluer la cytotoxicité médiée par les cellules tueuses naturelles envers les cellules cancéreuses

Pour commencer, prenez un tube contenant des cellules cancéreuses dans un milieu sans sérum afin de minimiser l’interférence de l’estérase sérique pendant le test. Incuber avec un colorant AM à base de calcéine non fluorescent.

Les estérases intracellulaires actives hydrolysent la calcéine AM en colorant de calcéine fluorescente imperméable à la membrane retenu dans le cytoplasme.

Plaquez les cellules cancéreuses colorées à la calcéine et les cellules NK effectrices dans les puits de test, tandis que les puits de contrôle ne contiennent que des cellules cancéreuses colorées à la calcéine sans cellules NK.

Les

récepteurs activateurs de surface cellulaire des cellules NK se lient aux ligands activateurs des cellules cancéreuses, formant une synapse immunitaire. Cette liaison active la signalisation des cellules NK, polarisant les granules cytotoxiques contenant des perforines et des granzymes vers la synapse pour la libération.

Les perforines forment des pores de la membrane cellulaire cancéreuse, facilitant l’entrée cellulaire des granzymes et initiant l’apoptose. L’intégrité compromise de la membrane provoque une fuite de calcéine fluorescente, réduisant ainsi la fluorescence des c