Analyse de l’efférocytose des thymocytes apoptotiques par les macrophages péritonéaux

L’efférocytose est le processus par lequel les cellules phagocytaires éliminent les cellules apoptotiques.

Pour analyser l’efférocytose, obtenir des thymocytes de souris sensibles à l’apoptose. Incuber avec un colorant CFSE perméable aux cellules.

Les estérases intracellulaires client le CFSE au colorant fluorescent imperméable aux cellules, colorant les thymocytes. Ajoutez du sérum inactivé à la chaleur pour éviter les taches excessives.

Déposer les thymocytes colorés sur une plaque de culture. Ajoutez de la staurosporine, un inhibiteur de la protéine kinase, qui perturbe la cascade de signalisation cellulaire critique, induisant l’apoptose. De plus, les résidus de phosphatidylsérine se déplacent vers le feuillet externe de la membrane cellulaire, fonctionnant comme des « signaux mange-moi ».

Ajoutez des concentrations croissantes de thymocytes apoptotiques à des puits de plaques multipuits contenant des macrophages péritonéaux de souris activés, qui expriment des récepteurs tyrosine kinases spécifiques.

Ces kinases se lient à la phosphatidylsérine exposée sur les thymocytes apoptotiques, facilitant ainsi leur internalisation par les macrophages.

Après l’incubation, retirez les th