Le test d’inhibition de l’hémagglutination pour détecter les anticorps sériques dirigés contre un antigène cible

Commencez par une plaque inférieure multi-puits en forme de V et ajoutez au puits de test du sérum dilué d’un humain vacciné contre la grippe contenant des anticorps spécifiques de la grippe.

Introduire l’hémagglutinine virale, un antigène spécifique de la grippe, dans les puits d’essai et de contrôle.

Pendant l’incubation, dans le puits d’essai, les anticorps spécifiques de la grippe interagissent avec les antigènes, formant des complexes. Dans le puits témoin, les antigènes restent non liés.

Incuber les puits avec des globules rouges aviaires ou GR.

Dans le puits témoin, les antigènes libres interagissent avec les récepteurs de surface des globules rouges spécifiques à l’hémagglutinine virale, provoquant l’agglutination des globules rouges, conduisant à l’hémagglutination et formant un motif compact au fond du puits.

Cependant, dans le puits de test, la présence de complexes antigène-anticorps et l’absence d’antigènes libres inhibent l’hémagglutination, fixant les globules rouges au fond.

Après le dosage, inclinez la plaque. Le puits témoin présente un petit motif circulaire compact avec un aspect brumeux, ce qui indique une hémagglutination.

En revanche, le puits de test montre un motif diffus en forme de larme, suggérant une inhibition de l’hémagglutination.

Commencez par étiqueter les plaques de microtitration à 96 puits avec les informations expérimentales appropriées. Ensuite, tournez la plaque dans l’orientation verticale et utilisez une pipette multicanaux pour ajouter 25 microlitres de PBS à chaque puits sauf le premier puits de la rangée de titrage inférieure arrière. Ajoutez 50 microlitres de la solution d’antigène d’intérêt fraîchement préparée dans le premier puits de la rangée de titrage arrière, puis ajoutez 25 microlitres d’échantillons de sérum traités par RDE dans les premiers puits des 10 rangées supérieures.

Ajoutez 25 microlitres de l’antisérum approprié dans le premier puits de la 11ème rangée comme contrôle positif. Ensuite, transférez 25 microlitres du premier puits de chaque rangée vers leurs puits successifs pour effectuer des dilutions en deux fois en série. Pipette de haut en bas 10 à 15 fois pour chaque étape de dilution, en jetant les 25 derniers microlitres des derniers puits.

Ensuite, ajoutez 25 microlitres de solution d’antigène dans chaque puits des rangées 1 à 11, et 25 microlitres de PBS uniquement dans chaque puits de la rangée de titrage arrière. Tapotez soigneusement l’assiette 10 fois sur les quatre côtés pour mélanger et couvrez l’assiette pendant 30 minutes à température ambiante. À la fin de l’incubation, ajoutez 50 microlitres de solution de globules rouges dans chaque puits et mélangez la plaque avec plus de tapotement. Ensuite, couvrez à nouveau la plaque et incubez les globules rouges selon l’espèce utilisée, comme indiqué dans le tableau.

Après avoir ajouté les globules rouges dans la plaque, respectez le temps d’incubation approprié pour le type de sang utilisé dans le test. Une incubation trop courte ou trop longue entraînera une mauvaise interprétation des résultats.

À la fin de l’incubation, évaluez l’hémagglutination en inclinant la plaque de 90 degrés pendant 25 secondes et marquez les résultats pour chaque puits pendant que la plaque est encore inclinée sur un schéma imprimé de la plaque à 96 puits.