Un test de cytotoxicité médiée par des protéines extracellulaires bactériennes sur les PMN
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:14 min • July 8th, 2025
Prenez une culture de Staphylococcus aureus, une bactérie pathogène qui sécrète de la leucocidine - une toxine formant des pores - comprenant des composants monomères S et F.
Granulez les cellules et diluez en série le surnageant. Transférez le surnageant contenant de la leucocidine dans une microplaque contenant des leucocytes polymorphonucléaires, ou PMN, et incubez.
Le composant S se lie à des récepteurs transmembranaires spécifiques sur les PMN, suivi d’une hétéro-oligomérisation avec le composant F à insérer dans la membrane cellulaire, entraînant la formation de pores.
Le pore provoque une diminution des ions potassium intracellulaires, activant la protéine 3 ou NLRP3 contenant le domaine pyrin de la famille NLR.
NLRP3 se lie à la protéine speck-like associée à l’apoptose contenant un domaine de recrutement de caspase, ou ASC, qui recrute la pro-caspase-1, formant un inflammasome.
L’auto-protéolyse convertit la pro-caspase-1 en caspase-1 active, déclenchant la mort cellulaire.
Récoltez les cellules à des intervalles définis. Ajoutez de l’iodure de propidium ou PI, qui pénètre dans les cellules mortes à travers les membranes endommagées pour lier l’ADN, émettant ainsi une fluo
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