Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Commencez avec une plaque multi-puits contenant des macrophages dérivés de la moelle osseuse sur des lamelles.
Traitez les macrophages avec Leishmania promastigotes - le stade infectieux du parasite.
Pendant l’incubation, les parasites interagissent avec les macrophages, facilitant l’assemblage de l’actine F autour du site d’interaction.
Les macrophages engloutissent les parasites dans des phagosomes entourés d’actine F, formant des vacuoles parasitophores ou PV - une niche réplicative.
Dans les PV, les parasites libèrent des facteurs de survie, augmentant l’accumulation d’actine F autour des vacuoles et inhibant leur fusion avec les lysosomes.
De plus, les parasites régulent à la hausse la production d’hepcidine – une hormone peptidique des macrophages, inhibant la libération de fer et augmentant les niveaux de fer intracellulaires.
L’afflux de fer dans les vacuoles favorise la différenciation des promastigotes en amastigotes pathogènes et facilite leur multiplication, augmentant ainsi la virulence.
Après l’incubation, laver pour éliminer les parasites libres, puis, fixer et perméabiliser les macrophages infectés.
Introduisez un colorant fluorescent d’acide nucléique pour colorer
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