Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 5:13 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multi-puits contenant des cellules épithéliales collées et traitez-la avec des mutants Coxiella marqués à la protéine fluorescente verte ; certains avec des mutations dans le gène du système de sécrétion de type IV, ou gène T4SS – crucial pour la réplication.
Les mutants réplicatifs interagissent avec les cellules épithéliales, déclenchant l’engloutissement de Coxiella, formant la vacuole contenant Coxiella, ou CCV, et recrutant la glycoprotéine membranaire-1 associée aux lysosomes, ou LAMP1 dans le CCV.
Cela facilite la sécrétion de protéines effectrices dans le cytoplasme cellulaire via le système de sécrétion de type IV, favorisant ainsi la réplication bactérienne.
Les mutants présentant des mutations du gène T4SS ne sont pas répliqués.
Après l’incubation, colorez les cellules avec un colorant fluorescent, fixez-les et perméabilisez la membrane cellulaire.
Introduire des anticorps primaires spécifiques de LAMP1 interagissant avec les protéines LAMP1 sur le CVC.
Superposez avec des anticorps secondaires marqués au fluorophore rouge, interagissant avec les anticorps primaires, tandis que le colorant Hoechst colore les noyaux des cellules.
Sous un microscope à épi
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