Visualisation de bactéries anaérobies internalisées dans les cellules endothéliales de l’hôte

Commencer par une suspension de Porphyromonas gingivalis en croissance active, une bactérie pathogène anaérobie.

Ajoutez BCECF-AM, un colorant non fluorescent et perméable aux cellules.

Les estérases cytoplasmiques actives hydrolysent le colorant sous une forme fluorescente et imperméable aux cellules, colorant les bactéries.

centrifugeuse. Remettre les bactéries en suspension dans un milieu anaérobie.

Ajoutez les bactéries marquées dans des puits de plaques multipuits contenant des lamelles avec des cellules endothéliales humaines collées.

Incuber dans une chambre anaérobie.

Les fimbriae bactériennes se lient aux récepteurs de surface des cellules endothéliales, initiant des cascades de signalisation intracellulaire.

Cela conduit à un réarrangement de l’actine et à l’internalisation bactérienne dans les phagosomes.

Après l’incubation, laver les lamelles avec un tampon pour éliminer les bactéries non internalisées.

Fixez les cellules avec du paraformaldéhyde pour préserver les structures cellulaires. Perméabiliser les cellules avec un détergent non ionique pour accéder aux cibles intracellulaires.

Ajoutez de la phalloïdine marquée par fluorescence, qui se lie aux filaments d’actine