Candida albicans Formation d’un biofilm dans un modèle murin in vivo

Prenez un morceau de cathéter recouvert de sérum dans un tube de microcentrifugation.

Ajoutez Candida albicans, un agent pathogène fongique commun produisant un biofilm.

Incuber pour permettre les interactions entre les adhésines de surface sur les cellules fongiques et les protéines sériques sur le cathéter, permettant ainsi l’adhérence fongique.

Lavez le cathéter avec un tampon pour enlever les cellules mal attachées.

Ensuite, préparez une souris immunodéprimée anesthésiée pour la chirurgie.

Faites une petite incision dans la peau et créez un tunnel sous-cutané.

Insérez un morceau de cathéter, préalablement infecté par des champignons, dans le tunnel.

Suturez l’incision.

Les cellules fongiques se divisent, formant des microcolonies sur le cathéter. Ces microcolonies sécrètent une substance polymère extracellulaire, ou matrice EPS, favorisant la cohésion cellulaire et l’adhésion à la surface.

L’EPS, un matériau riche en biomolécules, assure l’intégrité structurelle du biofilm et protège les microbes des défenses naturelles de l’hôte.

Au fil du temps, le biofilm fongique développe une structure tridimensionnelle complexe avec des canaux et des vides remplis d’eau, permettant l’échange de nutriments, l’élimination des déchets et la communication de cellule à cellule.

Vingt-quatre heures avant l’intervention chirurgicale, ouvrez l’emballage contenant les cathéters à triple lumière dans une enceinte de sécurité biologique. Utilisez une pince à épiler stérile pour enlever toutes les parties inutiles et un scalpel stérile pour couper la partie attachée au cathéter. Ensuite, placez une règle sous l’emballage en plastique et coupez le cathéter en polyuréthane en morceaux d’un centimètre de long. Ensuite, remplissez chaque cathéter avec environ 1,8 millilitre de sérum de veau fœtal à 100 % et incubez les morceaux à 37 degrés Celsius pendant la nuit.

Le lendemain matin, transférez chaque pièce de cathéter recouverte de sérum dans des tubes de microcentrifugation individuels de 1,5 millilitre et grattez C. albicans d’une plaque YPD dans 1 millilitre de PBS dans un tube de microcentrifugation séparé à une dilution de 1 à 100. Après le comptage, diluez la suspension cellulaire à une concentration finale de 5 fois 10 à la quatrième cellule par millilitre, et ajoutez 1 millilitre de cellules à chacun des morceaux de cathéter recouverts de sérum.

Laissez les cellules adhérer aux cathéters pendant 90 minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, en tenant les tubes en position verticale à l’aide d’une pince à épiler stérile, rincez doucement chaque morceau à travers la lumière deux fois avec 1 millilitre de PBS.

Pour placer les cathéters, commencez par raser le bas du dos d’une souris anesthésiée de 8 semaines, positionnée sur un coussin chauffant. Ensuite, désinfectez la peau et faites une petite incision de 0,5 à 1 centimètre de chaque côté de l’animal. Ensuite, disséquez l’hypoderme avec des ciseaux pour créer deux tunnels sous-cutanés d’environ 1,5 centimètre de long et 1 centimètre de large.

Insérez trois pièces de cathéter dans chaque tunnel, en vous assurant qu’elles se trouvent l’une à côté de l’autre dans une disposition horizontale sans se chevaucher. Fermez les incisions avec des sutures, puis nettoyez les plaies très doucement avec un désinfectant. Ensuite, appliquez un anesthésique local directement sur les incisions et administrez un agent d’inversion de l’anesthésie, en surveillant les animaux jusqu’à ce qu’ils soient complètement rétablis.