Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:18 min • July 8th, 2025
Commençons par les sous-populations de macrophages adhérents M1 et M2, qui se distinguent par leurs marqueurs de surface spécifiques. Ces cellules sont infectées par Mycobacterium tuberculosis, marqué par fluorescence.
Ajouter un tampon FACS aux puits de culture.
L’EDTA dans le tampon permet de détacher les cellules des puits de culture.
Transférez la suspension cellulaire dans des tubes de microcentrifugation.
Centrifugez les tubes. Jetez le surnageant. Remettez les cellules en suspension dans un cocktail d’anticorps anti-macrophages conjugué au fluorochrome et un colorant de viabilité, Zombie-UV.
Le colorant de fluorescence Zombie-UV pénètre dans les cellules mortes à travers les membranes endommagées et se lie aux protéines cytoplasmiques, permettant une différenciation claire des cellules viables non colorées.
De plus, les anticorps anti-macrophages conjugués par fluorescence se lient aux antigènes cibles sur les macrophages, ce qui permet une détection différentielle des sous-populations.
Lavez les cellules pour éliminer les anticorps non liés. Centrifugeuse. Retirez le surnageant.
Remettre les cellules en suspension dans un tampon fixateur pour réticuler les protéines, préser
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