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Immunologie
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Prenez une culture de cellules cancéreuses avec des protéines cytoplasmiques marquées par fluorescence.
Ajoutez des cellules tueuses induites par des cytokines ou CIK - des cellules T effectrices avec des caractéristiques naturelles de type cellule tueuse - possédant une activité antitumorale.
Les récepteurs tueurs naturels du groupe 2 membre D ou NKG2D sur les cellules CIK se lient aux protéines induites par le stress sur les cellules cancéreuses.
La liaison induit les cellules CIK à libérer des toxines granulaires cytoplasmiques - perforines et granzymes.
Les perforines forment des pores dans la membrane cellulaire cancéreuse, permettant l’entrée des granzymes, qui activent les caspases, induisant l’apoptose.
Après l’incubation, récoltez les cellules. Ajoutez un colorant fluorescent de viabilité cellulaire de liaison aux acides nucléiques.
Le colorant pénètre à travers la membrane cellulaire endommagée et se lie à l’ADN, ce qui entraîne des cellules mortes à double coloration.
Avec une membrane cellulaire intacte, les cellules vivantes sont imperméables au colorant.
Faites passer les cellules dans un cytomètre en flux pour détecter les cellules vivantes présentant une fluorescenc
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