Imagerie par tomographie par cohérence optique pour l’évaluation de l’uvéite dans un modèle murin
JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 3:12 min • July 8th, 2025
Prenez une souris anesthésiée pré-immunisée avec Mycobacterium tuberculosis, ou Mtb, qui induit une réponse immunitaire et génère des lymphocytes T spécifiques de Mtb.
Administrer des gouttes ophtalmiques pour la dilatation de la pupille afin d’améliorer la pénétration de la lumière pour une meilleure imagerie oculaire. Appliquez un gel pour prévenir la déshydratation de la cornée.
Enveloppez la souris dans de la gaze pour maintenir la chaleur corporelle et placez-la dans le système de tomographie par cohérence optique ou OCT.
Imagez les yeux pour obtenir des images en coupe transversale de la chambre antérieure, y compris la cornée et le cristallin, et de la chambre postérieure, y compris la rétine.
Examinez pour vous assurer de l’absence d’inflammation.
Injectez du Mtb tué par la chaleur dans la cavité vitrée. L’immunogène se propage dans l’œil et déclenche une réponse immunitaire, induisant l’infiltration de cellules T préformées spécifiques du Mtb et d’autres cellules immunitaires, entraînant une inflammation appelée uvéite.
L’OCT de la chambre antérieure révèle des cellules immunitaires infiltrées et un œdème cornéen, tandis que l’OCT de la chambre postérieure indique une inflammation du vitré.
Évaluez les images OCT en fonction de la gravité de l’inflammation pour quantifier la progression de l’uvéite.
Après avoir anesthésié la souris, dilatez la pupille avec une goutte de phényléphrine à 2,5 %, en évitant que l’excès de gouttelettes ne pénètre dans le nez ou la bouche. Après deux à trois minutes, tamponnez l’excès de liquide et couvrez l’œil avec du gel d’hypromellose à 0,3 %. Ensuite, enveloppez la souris dans une couche de gaze chirurgicale pour maintenir la chaleur corporelle, puis placez la souris sur la cassette de l’animal et positionnez la tête avec la barre de morsure.
Pour acquérir la tomographie par cohérence optique, ou images OCT, allumez le système d’imagerie OCT et ouvrez le logiciel d’imagerie. Pour l’imagerie de la chambre postérieure, approchez l’OCT de la surface de l’œil, en prenant soin de ne pas mettre la surface du cristallin en contact avec l’œil.
Une fois l’œil correctement positionné, arrêtez le balayage rapide, sélectionnez le protocole de balayage de volume et activez le balayage avec l’option Visée. Pour les images du segment postérieur, ajustez jusqu’à ce que le nerf optique soit centré dans l’image d’alignement horizontal B-Scan et que la rétine soit alignée avec l’axe d’alignement vertical. Pour les images du segment antérieur, ajustez la position pour centrer l’apex de la cornée dans l’image d’alignement B-Scan horizontale et l’image d’alignement B-Scan vertical. Enfin, cliquez sur Snapshot pour capturer l’image d’analyse du volume. Cliquez ensuite sur Enregistrer.
Aperçu
Cette étude décrit une méthode d'imagerie des réponses immunitaires dans l'œil à l'aide de la tomographie par cohérence optique (OCT) chez la souris. L'approche consiste à induire une uvéite par injection de Mycobacterium tuberculosis tué par la chaleur et à évaluer l'inflammation au moyen d'images OCT.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Immunologie
- Ophtalmologie
- Imagerie optique
Contexte
- L'uvéite est une affection inflammatoire qui touche l'œil.
- Mycobacterium tuberculosis peut induire des réponses immunitaires dans l'œil.
- La tomographie en cohérence optique (OCT) est une technique d'imagerie non invasive.
- Comprendre la réponse immunitaire dans l'œil peut aider au développement de traitements.
Objectif de l'étude
- Visualiser la réponse immunitaire dans l'œil à l'aide de la TOM.
- Quantifier la gravité de l'uvéite induite par le Mtb.
- Évaluer l'infiltration des cellules immunitaires dans les tissus oculaires.
Méthodes utilisées
- Induction d'une réponse immunitaire chez la souris à l'aide de Mtb tué par la chaleur.
- Administration de gouttes oculaires pour la dilatation de la pupille.
- Utilisation de la TOM pour capturer des images en coupe transversale de l'œil.
- Évaluation des images de TOM pour quantifier la gravité de l'inflammation.
Résultats principaux
- L'imagerie OCT a révélé des cellules immunitaires infiltrées et un œdème cornéen.
- Une inflammation du vitré a été observée dans la chambre postérieure.
- La cotation quantitative a indiqué des niveaux variables de progression de l'uvéite.
Conclusions
- L'étude démontre avec succès l'utilisation de la TOM pour l'imagerie de l'uvéite.
- L'inflammation induite peut être évaluée quantitativement par imagerie.
- Cette méthode peut aider à comprendre les réponses immunitaires dans les maladies oculaires.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle dans l'industrie
La tomographie par cohérence optique (OCT) permet une évaluation non invasive et longitudinale de l'inflammation oculaire dans les modèles précliniques, soutenant ainsi la validation des cibles et la réduction des risques mécanistiques dans le développement de médicaments ophtalmiques. En quantifiant l'infiltration des cellules immunitaires et l'œdème tissulaire, la OCT fournit des indicateurs prédictifs qui améliorent les décisions d'aller ou de ne pas aller de l'avant et réduisent le risque d'échec en phase avancée pour les traitements de l'uvéite. Cette approche d'imagerie relie la biologie fondamentale à la recherche translationnelle grâce à un score d'inflammation objectif et reproductible.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation d'hypothèses thérapeutiques en visualisant l'infiltration des cellules immunitaires dans les tissus oculaires.
- Valeur opérationnelle : Soutient la validation fonctionnelle des cibles grâce au suivi longitudinal de la dynamique de l'inflammation.
- Valeur prédictive : Améliore le tri des projets en corrélant les résultats d'imagerie avec la gravité de la maladie et la réponse au traitement.
Développement de criblage et de tests
- Préparation du test : Prépare des systèmes biologiques validés pour l'évaluation de composés grâce à un score d'inflammation standardisé.
- Reproductibilité : Garantit des résultats quantitatifs cohérents entre différentes sessions grâce à des protocoles standardisés d'acquisition OCT.
- Extensibilité : Permet une préparation au criblage à haut contenu en générant des images en coupe transversale adaptées à une analyse automatisée.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pour la maladie : Modélise une uvéite post-infectieuse avec infiltration de cellules immunitaires et fuite vasculaire, reflétant la physiopathologie humaine.
- Continuité translationnelle : Fait le lien entre la découverte et la validation préclinique en fournissant des métriques quantitatives de l'inflammation applicables au criblage thérapeutique.
- Progression ajustée au risque : Soutient les décisions d'aller ou de ne pas aller plus loin en associant des biomarqueurs d'imagerie aux voies mécanistiques de l'inflammation oculaire.
Intégration du pipeline et du flux de travail
L'imagerie OCT s'inscrit dans le continuum de la découverte, de la validation de cibles jusqu'à l'identification de composés actifs et aux tests précliniques d'efficacité, permettant des décisions fondées sur des données à chaque étape.
- Découverte en biologie : Soutient la vérification d'hypothèses en visualisant les réponses immunitaires et en précisant les voies inflammatoires dans l'œil.
- Écrans de sélection : Fournit des résultats quantitatifs reproductibles et prêts à l'analyse, permettant de comparer les effets de composés sur l'inflammation oculaire.
- Analytique : Propose une évaluation de l'inflammation fondée sur l'analyse d'images OCT, permettant aux équipes de quantifier la gravité et de suivre l'évolution.
- Recherche translationnelle : S'associe à la validation préclinique grâce à des biomarqueurs d'imagerie pertinents pour la maladie, reflétant l'évaluation clinique de l'uvéite.
- Réutilisation en entreprise : Fonctionne comme une plateforme d'imagerie réutilisable dans divers modèles de maladies oculaires et modalités thérapeutiques.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive en réduisant l'ambiguïté mécanistique des réponses immunitaires oculaires.
- Valeur opérationnelle : Assure la standardisation, la reproductibilité et la possibilité de généralisation de l'évaluation de l'inflammation entre les études.
- Valeur stratégique : Améliore les décisions d'orientation (go/no-go), renforce l'efficacité du capital et réduit les risques biologiques en phase avancée dans les programmes ophtalmologiques.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation et des décisions d'avancement ajustées au risque, fondées sur des métriques quantitatives de l'inflammation.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Requiert une expertise en anatomie oculaire, en fonctionnement des systèmes OCT et en analyse d'images pour l'évaluation de l'inflammation.
- Dépend de l'accès à des systèmes d'imagerie OCT précliniques capables de visualiser les segments antérieur et postérieur.
- Nécessite une standardisation inter-équipes des protocoles d'imagerie, des procédures de dilatation pupillaire et des critères d'évaluation.
- Implique des adaptations selon les souches de souris, les modèles de maladie et la pigmentation oculaire, qui affectent la pénétration de la lumière.
- Limité par la nécessité d'une anesthésie et d'une immobilisation, pouvant influencer l'état physiologique durant l'imagerie.
F.A.Q. sur la bio-industrie pharmaceutique
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Dernière mise à jour : 29 août 2026