Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:40 min • July 8th, 2025
Prenez des cellules leucémiques dans des milieux de croissance sans facteurs stimulants tels que les cytokines et incuberez-les.
L’absence de facteurs stimulants permet aux protéines phosphorylées intracellulaires de subir une déphosphorylation et de revenir à leur état natif.
Centrifugez et retirez le média. Remettre en suspension les cellules dans le stroma-surnageant contenant la cytokine, la lymphopoïétine stromale thymique, ou TSLP.
TSLP se lie à son récepteur sur la cellule leucémique, déclenchant la dimérisation du récepteur.
Cela rapproche les deux kinases associées à Janus, ou JAK, facilitant la transphosphorylation mutuelle.
Les JAK activés phosphorylent les queues cytoplasmiques du récepteur, créant des sites d’amarrage pour le transducteur de signal et l’activateur de la transcription, les monomères STAT.
Une fois phosphorylés, les STAT se dimérisent et se détachent du récepteur pour réguler les processus cellulaires en aval.
Fixer les cellules pour maintenir les états de phosphorylation des protéines intracellulaires.
Traitez les cellules avec une solution de perméabilisation pour augmenter la perméabilité de la membrane cellulaire.
Ajoutez des anticorps marqués par fl
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