Visualisation de bactéries dans des coupes de biopsie de la vessie par hybridation in situ par fluorescence

Commencez par une lame de verre portant une section de tissu de biopsie de la vessie urinaire infectée déparaffinisée et réhydratée contenant des bactéries uropathogènes.

Introduire des sondes universelles marquées par fluorescence - un oligonucléotide simple brin complémentaire spécifique à la région conservée de l’ARN ribosomique 16s bactérien, ou ARNr 16s.

Incuber la lame dans l’obscurité à une température élevée pour une hybridation optimale.

Pendant l’incubation, les sondes s’hybrident exclusivement dans la région conservée sur l’ARNr bactérien 16s, conférant une fluorescence verte aux bactéries.

Après l’hybridation, laver avec un tampon préchauffé pour retirer les sondes non liées.

Teindre la coupe de tissu avec un colorant Hoechst et des marqueurs de protéines cellulaires marqués au fluorophore.

Les molécules de Hoechst se lient à l’ADN, colorant les noyaux en bleu, tandis que les marqueurs marqués au fluorophore interagissent avec des composants cellulaires spécifiques tels que les filaments de mucine et d’actine, conférant une fluorescence rouge dans la section de biopsie.

Lavez la lame et ajoutez du support de montage à la section du mouchoir.

Au microscope confocal, la f