Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:54 min • July 8th, 2025
Prenez une suspension de cellules de Jurkat – cellules de leucémie des lymphocytes T.
Mélangez une aliquote avec un colorant de viabilité cellulaire et assurez-vous d’un nombre adéquat de cellules vivantes.
Placez les cellules dans une boîte de culture et appliquez un rayonnement ultraviolet C ou UVC pendant la durée requise.
Les UVC pénètrent dans les cellules et sont absorbés par l’ADN, formant des photoproduits de pyrimidine.
Après l’irradiation, incuber les cellules. Des dommages étendus à l’ADN médiés par les UVC initient la voie intrinsèque de l’apoptose, activant les protéines pro-apoptotiques sur la membrane mitochondriale externe.
Les protéines activées s’oligomérisent, formant des pores membranaires et libérant le cytochrome C de l’espace intermembranaire dans le cytoplasme.
Complexes du cytochrome C avec le facteur d’activation de la protéase apoptotique-1, formant un complexe apoptosome. L’apoptosome active les caspases, provoquant l’apoptose.
Introduisez de l’annexine V marquée au fluorophore pour marquer la phosphatidylsérine sur la membrane, un marqueur cellulaire apoptotique, et ajoutez de l’iodure de propidium qui pénètre à travers la membrane endommagée pour marqu
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