Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 5:37 min • July 8th, 2025
Prenez des tubes cytométriques contenant un mélange de coloration composé d’anticorps monoclonaux marqués par fluorescence en suspension dans un tampon de stimulation.
Ajoutez des concentrations décroissantes de l’allergène d’essai dans plusieurs tubes. Ajoutez des anticorps anti-IgE dans un tube pour servir de contrôle positif médié par les IgE, et ajoutez un tampon dans un autre tube pour le contrôle négatif.
Pipeter le sang périphérique humain dans les tubes. Couver.
Si la personne est sensibilisée à l’allergène d’essai, cette exposition fait en sorte que l’allergène se lie aux anticorps IgE spécifiques de l’allergène liés aux récepteurs Fc à la surface du basophile.
Les allergènes réticulent les récepteurs Fc liés aux IgE, provoquant l’activation des basophiles.
Les basophiles subissent une dégranulation, libérant des granules intracellulaires contenant des médiateurs inflammatoires, avec la régulation positive des molécules CD63 et CD203c.
Les anticorps monoclonaux marqués par fluorescence se lient à CD63, CD203c et CCR3 chez les basophiles, respectivement.
Baissez la température pour arrêter la dégranulation des basophiles.
Ajouter un tampon pour lyser les érythrocytes et fix
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