Surveillance en temps réel du métabolisme énergétique dans les cellules NK humaines à l’aide d’un analyseur de flux extracellulaire

Commencez avec une plaque de test recouverte d’un adhésif contenant une monocouche de cellules tueuses naturelles activées.

Positionnez une cartouche de capteur pré-calibrée contenant des sondes de capteur intégrées au fluorophore, entourée de plusieurs ports d’injection.

Chargez divers composés inhibiteurs de la respiration mitochondriale dans des orifices distincts de la cartouche.

Dans un analyseur de flux extracellulaire, des capteurs mesurent le taux de consommation d’oxygène des cellules, ou OCR, avec injection automatique de composé.

Lors de la première injection, l’oligomycine pénètre dans les mitochondries des cellules et interagit avec le complexe V de la chaîne de transport d’électrons, ou ETC, bloquant la synthèse de l’ATP et diminuant l’OCR.

La deuxième injection introduit du 2,4-dinitrophénol – un protonophore qui transporte les protons à travers les membranes mitochondriales, provoquant une fuite de protons. Pour restaurer le potentiel membranaire, la consommation d’oxygène augmente, maximisant ainsi l’OCR.

Enfin, avec la troisième injection, la roténone et l’antimycine A se lient respectivement aux complexes I et III de l’ETC, arrêtant l’ETC et diminuant l’OCR à son