Préparation d’un échantillon pour un test de cytotoxicité à médiation cellulaire tueuse naturelle pour l’analyse cytométrique en flux
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:40 min • July 8th, 2025
Commencez avec une pastille cellulaire contenant des cellules tueuses naturelles ou NK, et des cellules cibles colorées par fluorescence.
Remettez le granulé en suspension dans un milieu approprié et incubez.
La cellule NK interagit via des protéines d’adhésion de surface, formant une synapse immunologique avec la cellule cible.
Cela déclenche la signalisation des cellules NK, libérant des granules cytotoxiques, contenant de la perforine et des granzymes dans la synapse.
La perforine, une protéine qui forme des pores, crée des canaux dans la membrane de la cellule cible, permettant aux granzymes de pénétrer dans le cytoplasme.
Granzyme, une protéase à sérine, interagit avec les protéines intracellulaires, activant la voie apoptotique dans la cellule cible.
Maintenant, ajoutez un colorant fluorescent à l’iodure de propidium.
Le colorant pénètre dans les cellules mortes à travers leurs membranes endommagées et se lie à l’ADN en s’intercalant entre ses paires de bases.
Par conséquent, les cellules mortes expriment un fluorochrome double tandis que les cellules vivantes expriment un fluorochrome simple.
L’échantillon est prêt pour la cytométrie en flux afin d’évaluer la cytotoxicité in
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