Évaluation de la cytotoxicité et de l’intégrité membranaire dans des coupes pulmonaires via un dosage de la lactate déshydrogénase
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:58 min • July 8th, 2025
Commençons par des tranches de poumon humaines découpées avec précision, traitées avec des agents cytotoxiques comme des molécules de tensioactif dans une plaque multipuits.
Le tensioactif s’insère dans la bicouche lipidique de la cellule, provoquant l’interaction des queues hydrophobes du tensioactif avec le noyau hydrophobe de la bicouche lipidique.
Par conséquent, l’arrangement ordonné des molécules lipidiques est perturbé, conduisant à la formation d’une micelle.
Cela compromet l’intégrité de la membrane, provoquant la fuite de contenu intracellulaire, y compris la lactate déshydrogénase ou LDH, un indicateur courant de dommages à la membrane cellulaire.
Récupérez le surnageant contenant la LDH libérée.
Ajouter le cocktail de réaction du test LDH contenant du substrat de lactate, du NAD+, de la diaphorase et du sel de tétrazolium, et incuber.
La LDH oxyde le lactate en pyruvate, avec réduction simultanée de la coenzyme NAD+ en NADH.
La diaphorase utilise le NADH pour réduire le sel de tétrazolium en formazan - un produit coloré.
La cytotoxicité induite par le tensioactif peut être mesurée à partir de l’activité de la LDH indiquée par la production de formazan.
Après avoir incub
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