Mesure quantitative par cytométrie en flux de la phagocytose fongique des spores par les phagocytes humains

Prenez une plaque multi-puits contenant une suspension de leucocytes humains. Ajouter des spores fongiques pathogènes marquées au FITC.

Pendant l’incubation, les spores gonflent et brisent leur couche rigide de protéines hydrophobes, exposant les polysaccharides de la paroi cellulaire reconnus par des récepteurs de reconnaissance de motifs spécifiques sur les cellules phagocytaires.

Cette liaison déclenche des voies de signalisation intracellulaires, conduisant au réarrangement de l’actine et à l’internalisation des spores dans les phagosomes.

Selon l’état d’activation des phagocytes, certaines spores restent collées aux cellules sans internalisation.

Après l’incubation, récoltez les cellules et transférez-les dans un tube frais.

centrifugeuse. Remettez les cellules en suspension dans un tampon et transférez-les sur une plaque à fond en V à plusieurs puits.

Introduire des anticorps anti-FITC marqués au fluorophore qui se lient aux molécules de FITC exposées sur les spores adhérentes, en les contre-colorant.

centrifugeuse. Remettez les cellules en suspension dans un tampon et transférez-les dans des tubes de cytomètre en flux.

Effectuer une cytométrie en flux pour différencier les s