Un test d’immunofluorescence pour caractériser et quantifier les granules de stress chez les mammifères

Prenez une plaque multi-puits contenant des cellules d’ostéosarcome adhérentes sur des lamelles.

Ces cellules cancéreuses osseuses sont prétraitées avec un produit chimique induisant du stress, ce qui entraîne la formation de granules de stress.

Les granules de stress sont des organites cytoplasmiques sans membrane comprenant des ARNm non traduisants, de petites sous-unités ribosomiques, des protéines de liaison à l’ARN ou RBP, des facteurs liés à la traduction et des protéines de signalisation.

Jetez le support et lavez les cellules avec un tampon. Fixer les cellules pour préserver la morphologie cellulaire.

Perméabiliser les cellules pour accéder aux cibles intracellulaires. Ajoutez des protéines bloquantes pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Introduire des anticorps primaires qui se lient à des RBP spécifiques et à des facteurs liés à la traduction dans les granules de stress.

Incuber avec différents anticorps secondaires marqués au fluorophore et un colorant Hoechst.

Les anticorps secondaires se lient aux anticorps primaires liés aux protéines associées aux granules de stress, tandis que les molécules de Hoechst colorent l’ADN.

Montez les lamelles contenant le