Un virus de la grippe rapporteur fluorescent à la luciférase pour suivre les infections virales

Commençons par un virus grippal recombinant pathogène dont le génome a été modifié pour incorporer des gènes rapporteurs compacts.

Ces gènes rapporteurs codent pour une petite enzyme bioluminescente luciférase et une protéine fluorescente monomère.

Inoculez le virus par voie intranasale dans une souris anesthésiée, rasée de manière appropriée pour l’imagerie ultérieure.

Le virus pénètre dans la cellule hôte et libère son contenu génétique.

À l’intérieur du noyau, le génome viral se transcrit en molécules d’ARNm et se traduit ensuite pour produire de la luciférase et de la protéine fluorescente dans la cellule hôte.

Injectez un substrat de luciférine rétro-orbitale dans la souris.

L’enzyme luciférase oxyde la luciférine en oxyluciférine, qui, lors de la relaxation, émet un signal bioluminescent.

Mesurez le signal pour estimer les niveaux de luciférase, ce qui permet de surveiller les infections virales chez un animal vivant.

Pour l’analyse ex vivo, excisez les poumons et captez le signal de fluorescence grâce à une technique d’imagerie adaptée.

Contrairement aux variants réguliers, les protéines fluorescentes monomères ne forment pas d’agrégats, ce qui donne une image claire pour su