Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:59 min • July 8th, 2025
Commencez par des tubes contenant du sang total humain, y compris des globules rouges, ou GR, et des globules blancs, ou GB, tels que les monocytes et les granulocytes, et d’autres cellules sanguines.
Introduisez du dihydroéthidium – un indicateur de superoxyde et des bactéries non étiquetées dans un tube. Traitez l’autre tube avec des bactéries vertes marquées au fluorophore.
Les granulocytes et les monocytes interagissent avec les molécules associées aux agents pathogènes de la bactérie, les engloutissant dans les phagosomes.
Cela active l’enzyme membranaire phagosomale NADPH oxydase, réduisant l’oxygène moléculaire en un anion superoxyde.
L’anion superoxyde produit en outre du peroxyde d’hydrogène - une espèce réactive de l’oxygène, ou ROS, entraînant une explosion oxydative.
À l’intérieur du phagosome, les ROS oxydent le dihydroéthidium pour former du 2-hydroxyéthidium, qui colore l’ADN bactérien, conférant une fluorescence rouge.
Introduire un désaltérant, pour éteindre la fluorescence extracellulaire.
Ajoutez une solution de lyse, éliminant ainsi les interférences potentielles des globules rouges, et corrigez les globules blancs.
En cytométrie en flux, les cellules à fluoresc
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