Un test pour quantifier la phagocytose médiée par des anticorps d’érythrocytes infectés par des parasites

Prenez les érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum. Marquez l’ADN du parasite avec un colorant fluorescent pour la visualisation du parasite.

Incuber ces érythrocytes infectés par le parasite avec des sérums provenant d’individus exposés au paludisme. Ces cellules présentent à leur surface des antigènes parasitaires, qui se fixent aux anticorps IgG humains acquis naturellement dans les sérums, opsonisant les cellules pour la phagocytose.

Transférez les érythrocytes infectés par le parasite opsonisé dans une plaque multipuits recouverte de protéines contenant une suspension de monocytes d’origine humaine - ou cellules phagocytaires.

Pendant l’incubation, les récepteurs Fc-gamma des monocytes interagissent avec les érythrocytes opsonisés par les IgG, déclenchant l’engloutissement des érythrocytes dans les phagosomes.

Après l’incubation, centrifuger la plaque pour éviter d’autres interactions cellulaires et arrêter la phagocytose.

Jetez le surnageant. Traiter avec une solution de lyse de chlorure d’ammonium, en rompant sélectivement les érythrocytes infectés non phagocytés sans affecter les monocytes.

Ajoutez un tampon contenant du sérum pour arrêter le processus de lyse. Cent