Un test in vitro pour l’étude de la cytotoxicité des lymphocytes T CD8⁺ préactivés contre les cellules cancéreuses

Prenez deux populations de lymphocytes T CD8⁺ : des lymphocytes T CD8⁺ effecteurs préactivés par l’engagement des lymphocytes T et des récepteurs co-stimulateurs médiés par des anticorps et des lymphocytes T CD8⁺ supprimés inhibés par des cellules suppressives dérivées de myéloïdes.

Ajoutez ces lymphocytes T dans des puits recouverts d’une membrane basale avec des cellules cancéreuses exprimant une protéine fluorescente restreinte au nucléaire.

Pipetez un substrat fluorogène de la caspase-3 - un colorant fluorogène de liaison à l’ADN conjugué à un peptide contenant un site de reconnaissance de la caspase-3.

couver. Les récepteurs effecteurs des lymphocytes T se lient au complexe peptidique CMH de classe I sur les cellules cancéreuses, déclenchant la libération de granules cytotoxiques contenant des perforines et des granzymes.

Les perforines créent des pores de membrane cellulaire cancéreuse, permettant l’entrée de granzyme et l’activation des caspases, initiant l’apoptose.

Les caspases activées clivent en outre le substrat fluorogène de la caspase, libérant le colorant qui se lie à l’ADN et devient fluorescent.

Au microscope à fluorescence, les cellules cancéreuses co-cultivées av