Un test multiplex basé sur des billes pour l’analyse des cytokines dans des échantillons de larmes humaines

0 vues4:46 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ajoutez des échantillons de larmes humaines et un cocktail d’anticorps et de billes dans une plaque de test lavée.

Les anticorps sont liés à des billes magnétiques codées par couleur, imprégnées de proportions variables de fluorophores correspondant à des signatures spectrales distinctes, facilitant la détection de plusieurs cytokines.

Les cytokines lacrymales se lient à leurs anticorps de capture correspondants liés aux billes.

À l’aide d’un rondeur de plaque magnétique, déposez les complexes anticorps-billes. À l’aide d’un tampon, retirez les biomolécules non liées.

Ajoutez des anticorps de détection biotinylés qui se fixent aux cytokines liées.

Pipette conjuguée streptavidine-phycoérythrine, qui se lie aux anticorps biotinylés.

À l’aide de la rondelle de plaques, retirez le contenu du puits non lié. Remettre en suspension les complexes liés aux cytokines dans le liquide de gaine.

Lors de l’analyse des échantillons, le système fluidique transporte les complexes de billes vers l’assemblage optique.

Le premier laser active les colorants internes des billes, le signal résultant identifiant des cytokines spécifiques.

Le second laser active la molécule rapporteure liée au complexe de billes, dont l’intensité du signal représente la concentration de cytokines, permettant la quantification simultanée de plusieurs cytokines.

Pour effectuer le test multiplex à base de billes, amenez tous les réactifs à température ambiante et agitez-les pendant cinq à 10 secondes. Si les échantillons de larmes éluées ont été entreposés à moins 80 degrés Celsius avant le dosage, décongelez les extraits lacrymaux congelés sur de la glace et centrifugez les échantillons à 1 000 fois g pendant cinq minutes. Préparez une feuille de travail de test dans une configuration verticale pour les étalons de cytokines humaines QC-1, QC-2 et les échantillons.

Ajoutez 200 microlitres de 1x tampon de lavage dans chaque puits de la plaque et scellez-le avec une scelleuse de plaques. Ensuite, incubez l’assiette sur un agitateur à température ambiante pendant 10 minutes. Ensuite, décantez le tampon de lavage 1x en inversant la plaque et tapotez-le plusieurs fois sur des serviettes absorbantes pour éliminer toute quantité résiduelle de tampon de lavage dans les puits.

Ensuite, ajoutez 25 microlitres de chaque étalon de cytokines humaines QC-1, QC-2 et le blanc avec juste le tampon de dosage et les échantillons dans les puits appropriés. Ajoutez 25 microlitres de tampon de dosage dans chaque puits. Ensuite, dans les puits, ajoutez 25 microlitres de 1x solution de cocktail de billes d’anticorps.

Comme la solution de billes d’anticorps est sensible à la lumière, scellez la plaque et couvrez-la d’une feuille d’aluminium et d’un couvercle de plaque pour la protéger de la lumière pendant le test. Incuber l’assiette à quatre degrés Celsius sur un shaker pendant la nuit. Le lendemain, placez la plaque sur le support à plaques d’une rondelle de plaque magnétique automatique et laissez-la reposer pendant une minute pour déposer les billes magnétiques au fond du puits.

Aspirez le contenu du puits et ajoutez 200 microlitres de tampon de lavage par puits à l’aide d’un laveur de plaques magnétique automatique. Laissez reposer l’assiette pendant une minute, puis aspirez le contenu du puits comme précédemment et répétez le lavage une fois de plus. Ajoutez 25 microlitres de solution d’anticorps de détection dans chaque puits. Scellez l’assiette, couvrez-la de papier d’aluminium et d’un couvercle d’assiette, et incubez à température ambiante sur un shaker pendant 60 minutes. Ensuite, ajoutez 25 microlitres de solution de streptavidine-phycoérythrine dans chaque puits, et après avoir scellé et recouvert la plaque, incubez à température ambiante sur un shaker pendant 30 minutes.

Après l’incubation, placez la plaque sur un rondelle de plaque magnétique et laissez-la reposer pendant une minute. Ensuite, aspirez le contenu du puits et ajoutez 200 microlitres de tampon de lavage par puits. Laissez reposer pendant une minute, puis aspirez le contenu du puits avant de répéter le lavage une fois de plus. Ajouter 150 microlitres de liquide de gaine dans chaque puits. Ensuite, placez la plaque sur un agitateur pendant cinq minutes à température ambiante pour remettre en suspension les billes d’anticorps avant de procéder à la lecture de la plaque et à l’analyse des concentrations de cytokines.

11:00

Multiplex Cytokine profilage des splénocytes de souris stimulés à l’aide d’une plateforme axée sur la cytométrie de flux perle Immunoassay

Vidéos connexes

0 Vues

06:29

Effet des formulations de larmes artificielles sur l’activité métabolique des cellules épithéliales cornéennes humaines après exposition à la dessiccation

Vidéos connexes

0 Vues

07:08

Un test de neutralisation rapide et multiplex à double rapporteur IgG et IgM SARS-CoV-2 pour un système d’analyse de débit à base de billes multiplexées

Vidéos connexes

0 Vues

06:29

Mesure précise et simple de la cytokine pro-inflammatoire IL-1β en utilisant un dosage de sang total Stimulation

Vidéos connexes

0 Vues

04:45

Dosage immunobille multianalyte : une technique d’immunodosage basée sur le flux pour la détection simultanée de plusieurs sous-types d’anticorps dans un échantillon de sérum humain

Vidéos connexes

0 Vues

04:49

Un immunodosage multiplex basé sur des billes pour quantifier plusieurs cibles de cytokines

Vidéos connexes

0 Vues

09:22

Perles base essai Multiplex pour l’analyse des profils de Cytokine de larme

Vidéos connexes

0 Vues

06:37

Utilisation de réactifs de référence pour confirmer la robustesse des tests de libération de cytokines pour la prédiction de l’innocuité des anticorps monoclonaux

Vidéos connexes

0 Vues

09:43

Approche microfluidique pour résoudre la sécrétion simultanée et séquentielle de cytokines de cellules polyfonctionnelles individuelles

Vidéos connexes

0 Vues

09:04

Optimisation de la collecte de larmes chez la souris pour l’analyse de l’ARNm et des protéines

Vidéos connexes

0 Vues

Dernière mise à jour : 15 août 2026