Mesure de l’inhibition de la croissance des plantules induite par le système immunitaire

Transplantez les semis dans des puits contenant les concentrations souhaitées d’un peptide d’élicitor immunitaire – un fragment de protéine dérivé de molécules associées à des agents pathogènes.

Ce peptide se lie aux récepteurs de reconnaissance de formes, ou PRR, sur les cellules végétales, initiant une cascade de signalisation.

Cette cascade comprend la phosphorylation de l’homologue de l’oxydase respiratoire, ou protéines RBOH, qui deviennent enzymatiquement actives et catalysent la production d’espèces réactives de l’oxygène ou ROS.

Les ROS agissent comme des messagers secondaires dans les voies de signalisation immunitaire, amplifiant la réponse de défense initiée par les PRR, et fonctionnent comme des agents antimicrobiens directs, inhibant la croissance des agents pathogènes en endommageant leurs composants cellulaires.

Pendant la production de ROS, la plante alloue de l’énergie et des nutriments pour soutenir sa réponse immunitaire, détournant les ressources des processus liés à la croissance qui entraînent une inhibition de la croissance.

Déterminer le pourcentage d’inhibition de la croissance chez les plantules traitées à l’élicitor par rapport aux plantules non traitées en corrélant leur poids frais.

L’augmentation des concentrations d’élicitors peptidiques inhibe la croissance des plantules en raison de réponses immunitaires accrues et des altérations biochimiques associées.

Quatre jours après la fin de l’opération, chargez chaque puits d’une plaque de 48 puits avec 500 microlitres de milieu MS complété par une dilution de peptide d’éliciteur. Ensuite, à l’aide d’une pince stérile, transplantez soigneusement six à huit semis de la même taille, du même âge et du même génotype à chaque dilution peptidique, en veillant à ce qu’il n’y ait pas de dommages au semis ou de casse de la racine et que la racine soit immergée dans un milieu.

Lorsque tous les semis ont été plaqués, scellez les plaques avec du ruban adhésif microporeux et placez les plantes dans des conditions standard de jours courts pendant huit à 12 jours. Pour déterminer le pourcentage d’inhibition de la croissance, prenez une photo pour enregistrer visuellement l’inhibition de la croissance avant de retirer soigneusement les semis de chaque puits. Ensuite, tamponnez les racines sur une serviette en papier pour les faire sécher et pesez chaque semis sur une balance analytique.