Un test pour détecter la production d’espèces réactives de l’oxygène dans les tissus de riz lors de l’élicitation immunitaire
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:42 min • July 8th, 2025
Prenez une microplaque contenant des segments de gaine uniformes coupés à partir de plants de riz et des disques de feuilles obtenus à partir de feuilles de riz.
Ajoutez de l’eau stérile et incubez pendant la nuit pour permettre la récupération du stress de la plaie.
Ajoutez un peptide immunogène dérivé de flagelles bactériens qui agit comme un motif moléculaire associé à un agent pathogène ou PAMP.
Les cellules végétales sur les bords coupés se lient aux PAMPs via des récepteurs de reconnaissance de formes.
La liaison déclenche la signalisation en aval, activant une enzyme localisée dans la membrane plasmique appelée homologue de l’éclatement oxydase respiratoire ou RBOH.
Le RBOH activé produit des espèces réactives de l’oxygène ou ROS dans l’apoplast - l’espace intercellulaire. Le ROS produit est converti en peroxyde d’hydrogène.
Ajoutez une enzyme peroxydase et un substrat chimiluminescent.
La peroxydase utilise le peroxyde d’hydrogène pour convertir le substrat en un état intermédiaire excité, qui libère de l’énergie sous forme de lumière et retourne à l’état fondamental.
Mesurez la luminescence dans les deux types de tissus pour détecter une forte augmentation immédiatement ap
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