Mesure de l’alloréactivité dans une population mixte de lymphocytes T

Commencez avec une plaque multipuits contenant des cellules dendritiques de souris, ou CD portant des alloantigènes ou des variantes génétiques d’auto-antigènes.

Introduire des lymphocytes T de souris, y compris des lymphocytes T alloréactifs qui ne réagissent pas aux auto-antigènes, tout en reconnaissant les antigènes étrangers.

Les lymphocytes T alloréactifs reconnaissent ces alloantigènes et interagissent avec les DC, déclenchant le réarrangement du cytosquelette, y compris la réorganisation de l’actine F.

Cela favorise les récepteurs des lymphocytes T à s’engager avec des molécules co-stimulatrices sur les CD, formant une connexion cellulaire – une synapse immunologique.

Fixez les cellules, transférez-les dans un tube et introduisez un cocktail d’anticorps marqués au fluorochrome spécifiques aux récepteurs des lymphocytes T et des DC Lymphocytes, conférant une fluorescence distincte.

Retirez les anticorps non liés et remettez les cellules en suspension dans un tampon contenant un agent perméabilisant qui perméabilise les cellules et des marqueurs protéiques verts marqués au fluorophore qui se lient à l’actine F.

Centrifugez et mettez à nouveau en suspension les cellules dans un