Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:08 min • July 8th, 2025
Prenez des tubes contenant des macrophages rapporteurs avec le gène de la phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée ou de l’enzyme SEAP sous un promoteur inductible.
Dans un tube, introduisez un anticorps spécifique du macrophage Toll-like receptor 2 ou TLR2, neutralisant son activité.
Dans un autre, ajoutez un inhibiteur pour supprimer la signalisation TLR4. Laissez le dernier tube non traité.
Prenez une lame chambrée avec une couche adsorbée de motifs moléculaires associés aux dommages ou DAMP - des protéines libérées lors de la nécrose cellulaire.
Ajouter les macrophages traités et non traités dans des puits séparés et incuber.
TLR2 et TLR4 sur les macrophages non traités se lient aux DAMPs, activant les facteurs de transcription du facteur nucléaire kappa-B, ou NF-κB, et de la protéine activatrice-1, ou AP-1.
Ceux-ci se déplacent vers le noyau et se lient au promoteur de SEAP, régulant à la hausse la production de SEAP, qui est sécrété extracellulairement.
Transférez le surnageant contenant des PAED dans une microplaque avec un substrat chromogène.
Le PAED hydrolyse le substrat, produisant un produit de couleur violet-bleu. Mesurez l’absorbance.
La neutralisation de TLR2 rédui
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