Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 5:54 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multipuits contenant des fibroblastes de souris dans un milieu privé de sérum. Ajoutez des dilutions en série d’anticorps spécifiques du TNFα.
Ajoutez du TNFα - une cytokine inflammatoire.
couver. La privation sérique induit un stress cellulaire, rendant les cellules sensibles à l’apoptose médiée par TNFα.
Laliaison du TNFα à ses récepteurs sur les cellules privées de sérum déclenche des cascades de signalisation intracellulaires, activant la cascade de caspase et induisant l’apoptose.
Cependant, la liaison des anticorps au TNFα empêche sa liaison au récepteur, inhibant ainsi l’activation de la caspase.
Après l’incubation, ajoutez un mélange de réactifs contenant un détergent, un substrat de caspase proluminescent et une enzyme luciférase ainsi que des ions ATP et magnésium. Mélangez et incuber.
Le détergent perméabilise les membranes, libérant des caspases des cellules induites par le TNFα.
Le substrat bioluminescent contient un site de reconnaissance des caspases. Des caspases spécifiques clivent le substrat, générant de l’aminoluciférine.
La luciférase oxyde son substrat, l’aminoluciférine, ce qui entraîne l’émission de lumière.
Mesurer l’intensité de la lumin
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques