Technique de coloration peptide-CMH-I tétramère pour analyser les lymphocytes T mémoires CD8⁺ spécifiques du SIV

Prenez des cellules mononucléées de sang périphérique de primates non humains, ou PBMC, contenant des lymphocytes T mémoires CD8⁺ contre le virus de l’immunodéficience simienne ou VIS.

Ajoutez un inhibiteur de la protéine kinase pour empêcher l’internalisation du récepteur des lymphocytes T, ou TCR, lors de la stimulation ultérieure.

Introduire le complexe d’histocompatibilité peptide-majeur de classe I, ou tétramères pMHC-I, des complexes conjugués aux fluorophores comprenant quatre molécules du CMH-I liées à des peptides spécifiques du SIV. Ces peptides se lient aux TCR à la surface des lymphocytes T.

Ajoutez un mélange contenant des anticorps conjugués aux fluorophores qui se lient aux cellules CD8, CD28 et CCR7 (marqueurs délimitant les sous-ensembles de cellules T mémoire) et des anticorps marquant les cellules non CD8⁺.

Un colorant de viabilité fluorescente permet d’étiqueter les cellules mortes.

Fixez les cellules. Perméabiliser pour accéder à des cibles intracellulaires.

Ajoutez des anticorps conjugués aux fluorophores qui se lient à CD3, un marqueur des lymphocytes T, et un granzyme B intracellulaire, un marqueur des lymphocytes T CD8⁺ activé.

À l’aide de la cytométrie en