Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez une plaque multipuits contenant un modèle d’infection à Mycobacterium tuberculosis ou Mtb établi.
Les puits contiennent des agrégats cellulaires comprenant un noyau de macrophages nécrotiques infectés par Mtb et Mtb densément tassés, entourés de macrophages non infectés – imitant l’infection in vivo.
Prenez une dilution en série des antibiotiques rifampicine et moxifloxacine.
Jetez le milieu de la plaque d’infection, transférez les dilutions d’antibiotiques dans les puits et incuberez.
Les antibiotiques se diffusent à travers les agrégats cellulaires et pénètrent dans les cellules bactériennes.
La rifampicine se lie à l’ARN polymérase bactérienne, inhibant la synthèse de l’ARN et provoquant la mort bactérienne.
La moxifloxacine se lie à la topoisomérase de l’ADN bactérien, inhibant la réplication et arrêtant la croissance bactérienne. La liaison induit également des réponses de stress, y compris l’accumulation d’espèces réactives de l’oxygène, tuant les bactéries.
Après l’incubation, ajoutez de la resazurine - un indicateur redox. À l’intérieur des bactéries vivantes et métaboliquement actives, l’enzyme oxydoréductase réduit la résazurine bleue en résorufine fluorescente ros
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