Un test pour cribler des nanoparticules bioactives pour l’inhibition de la signalisation des récepteurs de type Toll
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:53 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multipuits avec différents macrophages rapporteurs hébergeant le gène de la phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée, ou SEAP, ou un gène de la luciférase sécrété sous promoteurs inductibles.
Ajouter des milieux contenant différents hybrides de nanoparticules peptide-or mélangés à des lipopolysaccharides ou à des LPS dans des puits désignés.
Le LPS se lie aux récepteurs de type Toll des macrophages, ou TLR, déclenchant l’internalisation dans l’endosome.
La pompe à protons endosomale transporte les protons à l’intérieur. L’acidification déclenche la signalisation TLR, activant les facteurs de transcription.
Ces facteurs induisent l’expression des gènes rapporteurs, produisant SEAP ou luciférase.
Alternativement, l’internalisation du LPS avec les hybrides amène les groupes peptidiques chargés négativement à séquestrer les protons luminaux, empêchant l’acidification endosomale et inhibant la signalisation TLR.
Recueillir le milieu, centrifuger pour séparer le surnageant et ajouter des substrats pour le PAED et la luciférase.
Le PAED convertit son substrat en un produit coloré, tandis que la luciférase catalyse son substrat pour produire de la luminescence.
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