Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 6:23 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multipuits contenant une monocouche de cellules de mammifères.
Inoculer les puits avec des dilutions en série d’homogénats de tissus contenant le virus Zika, dérivé de différents organes d’une souris infectée.
Lors de l’entrée dans les cellules via l’endocytose, le virus se multiplie et bourgeonne pour infecter les cellules voisines.
Recouvrir d’une solution de méthylcellulose à haute viscosité, créant une barrière physique qui limite le mouvement du virus.
La barrière ne permet d’infecter que les cellules voisines immédiates, formant des foyers de cellules infectées, et garantit que chaque foyer provient d’une seule particule virale, ce qui permet une quantification précise.
Fixer les cellules et perméabiliser la membrane. Ajoutez des anticorps primaires qui pénètrent dans les cellules et interagissent avec l’antigène viral.
Introduisez un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase qui se lie à l’anticorps primaire.
Ajoutez un substrat chromogène qui est converti par la peroxydase pour créer des taches colorées, indiquant les foyers des cellules infectées.
Comptez les foyers pour quantifier le titre de virus dans les différents organes de la souris.
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