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Immunologie
0 vues • 2:49 min • July 8th, 2025
Prenez une suspension fécale de souris composée de bactéries lactiques, ou LAB, qui produisent de la bactériocine, un peptide antimicrobien, et inoculez-la dans un milieu de gélose molle sélectif LAB préchauffé.
Versez le milieu dans une plaque de gélose en formant la première couche.
Superposez une deuxième couche de gélose et incuberez.
La première couche favorise sélectivement la croissance des LAB, permettant aux molécules de bactériocine sécrétées de se diffuser vers l’extérieur des colonies dans le milieu environnant.
La deuxième couche contient un milieu acellulaire qui permet la diffusion de la bactériocine et empêche la croissance des colonies de LAB à la surface.
Maintenant, versez une troisième couche de gélose contenant une souche sensible à la bactériocine.
Les bactéries qui se développent dans la troisième couche rencontrent la bactériocine qui se diffuse à partir des couches inférieures.
La bactériocine perturbe la membrane cellulaire des bactéries sensibles, perturbant l’homéostasie cellulaire et entraînant la mort cellulaire, visible sous la forme d’une zone claire sur la troisième couche.
Mesurez le diamètre de la zone pour évaluer la puissance de la bactériocine.
Pour compter les cellules bactériennes productrices de bactériocine dans les échantillons fécaux, transférez les cellules diluées du producteur de bactériocine dans 4 millilitres de gélose molle MRS préchauffée. Mélangez la gélose par vortex et versez les cellules sur une plaque de gélose MRS 1,5 %. Cette couche est appelée première couche.
Transférez encore 4 millilitres de gélose molle MRS sans cellule à 0,8 % sur la première couche pour intégrer toutes les cellules dans la gélose molle. Cette couche est destinée à empêcher les cellules de se développer en colonies à la surface des plaques de gélose.
Dans la hotte stérile, séchez les plaques en enlevant le couvercle pendant cinq à 10 minutes avant de les incuber à 30 degrés Celsius pendant 20 à 24 heures pour la croissance cellulaire et la formation de colonies.
Pour identifier les colonies productrices de bactériocine, mélangez 40 microlitres d’une culture de nuit d’une souche indicatrice appropriée avec 4 millilitres de gélose molle préchauffée pour chaque plaque. Versez le mélange dans les assiettes. Cette couche est appelée la troisième couche.
Séchez et incubez les plaques comme précédemment, pour la croissance cellulaire et la formation de colonies. Les colonies productrices de bactériocine ont des zones d’inhibition claires autour des colonies.