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Immunologie
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Prenez deux microplaques contenant des lamelles avec des macrophages dérivés de la moelle osseuse ou BMM.
Ajoutez des promastigotes métacycliques de Leishmania – le stade flagellé allongé – dans une plaque et des amastigotes – le stade ovale non flagellé – dans une autre plaque.
Pendant l’incubation, les parasites se lient aux récepteurs des macrophages, déclenchant une phagocytose médiée par les récepteurs.
Le phagosome fusionne avec les lysosomes et les vésicules dérivés du réticulum endoplasmique et de l’appareil de Golgi, se transformant en une vacuole parasitophore.
La diminution du pH de la vacuole déclenche la différenciation du promastigote en amastigote et sa réplication.
Laver pour éliminer les parasites non internalisés.
Fixez les macrophages infectés et ajoutez un détergent pour perméabiliser les cellules et les parasites.
Introduisez un colorant d’acide nucléique fluorescent pour colorer les noyaux des macrophages et des parasites.
Montez les lamelles sur des lames et observez au microscope à fluorescence, en quantifiant les plus grands noyaux de l’hôte et les petits noyaux d’amastigote environnants.
Comparez le nombre d’amastigotes pour évaluer leur multiplication dan
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