Mesure de la TEER dans des cellules épithéliales irradiées aux rayons X co-cultivées avec des PBMC

Prenez un insert de membrane contenant une monocouche épithéliale irradiée aux rayons X.

Placez l’insert de membrane dans un puits contenant des cellules mononucléées du sang périphérique, ou PBMC - des cellules immunitaires qui sécrètent des cytokines et d’autres molécules de signalisation.

Placez la résistance électrique transépithéliale, ou électrodes TEER, dans l’insert de la membrane.

Appliquez un faible courant électrique et mesurez la résistance pour évaluer la perméabilité monocouche régulée par des jonctions serrées.

Les jonctions serrées sont des protéines transmembranaires liées au cytosquelette par des protéines d’échafaudage.

Ensemble, ces protéines jonctionnelles forment une barrière robuste entre les membranes cellulaires, limitant le passage des grosses molécules et des agents pathogènes.

Les protéines jonctionnelles intactes entravent la circulation du courant électrique, ce qui entraîne un TEER élevé, indiquant une perméabilité monocouche normale.

L’exposition aux rayons X réduit les niveaux de protéines jonctionnelles, augmentant la perméabilité des monocouches et abaissant la TEER.

De plus, les molécules de signalisation des cellules irradiées activent des PBMC co-cultivés qui libèrent des cytokines, déclenchant une réduction supplémentaire des niveaux de protéines jonctionnelles et perturbant l’intégrité de la barrière.

Par conséquent, la perméabilité monocouche augmente, ce qui entraîne une diminution supplémentaire du TEER.

Pour évaluer la résistance électrique transépithéliale, ou TEER, des cellules Caco-2 immédiatement après l’irradiation, transférez la moitié des inserts de culture cellulaire Caco-2 dans une nouvelle plaque avec 3 millilitres de milieu complet frais dans chaque puits, et la moitié des cultures d’insertion dans une nouvelle plaque ensemencée avec 2 x 10⁶ PBMC par 3 millilitres de milieu complet par puits. Ensuite, placez une électrode de baguette TEER dans l’insert de culture cellulaire toutes les heures pendant les six premières heures, puis toutes les trois heures jusqu’à 48 heures après l’irradiation.